Serochem PEI转染试剂使用步骤是怎样的?

Serochem PEI转染试剂使用步骤是怎样的?

Serochem PEI转染试剂——PEI Prime™️ 是一种高性能转染试剂,设计用于稳健、低成本和可扩展的瞬时基因表达。PEI是HEK293和CHO悬浮培养物瞬时转染最chang用的试剂。PEI Prime™️ 是在哺乳动物表达系统中生产重组蛋白、抗体和病毒(AAVs、BVs等)的shou试剂。PEI Prime™️ 粉末是一种非常精细的盐酸盐,可以节省数小时的处理时间,并最大限度地降低试剂制备过程中出错的风险。PEI Prime™️ 粉末可以使用下面的“液体配方”说明转化为转染试剂,也可以作为PEI Prime AQ的配方溶液购买。

Serochem PEI转染试剂使用步骤是怎样的?在转染的时候如何使用呢?让我们一起来看看Serochem PEI转染试剂的使用说明吧(以货号:Prime-P100-100MG为例)!

1.准确称量并溶解100 mg PEI Prime粉末溶于80mL细胞培养级水中。混合几分钟来溶解粉末。(混合后可能会残留微量固

体。如果存在,这些将在随后的步骤中移除。这些不会影响性能。)

2. 逐渐向PEI Prime中加入0.1M氢氧化钠溶液,同时用pH计监测,将pH调节至7.0+/-0.1。在添加钠之间充分混合氢氧化物。

(这应该使用少于10毫升的氢氧化钠溶液。)

3. 加入细胞培养级水,加入PEI Prime溶液以使总体积达到100mL。

4. 在无菌环境中,如清洁的生物安全机柜或洁净室外壳,无过滤溶液带有(0.1或0.2)μm注射器过滤器的无菌储存集装箱。

(建议使用PES过滤膜。尼龙膜是可以接受的。)

5. 在容器上贴上标签,并在4°C温度下储存6个月。(不要冻结。不要使用冷冻过一次以上的等分试样。)

Serochem PEI转染试剂使用步骤是怎样的?你掌握了吗?如果没有掌握或者是有什么问题的话,欢迎来电或多渠道咨询Serochem

代理——上海金畔生物科技有限公司客服!



Serochem PEI转染试剂在CHO悬浮细胞上的转染步骤

Serochem PEI转染试剂在CHO悬浮细胞上的转染步骤

Serochem PEI转染试剂在CHO悬浮细胞上的转染步骤如下:

一、转染前

传代和扩增细胞以获得具有大于95%的活力和介于(1.5至2.0)x 106之间的活细胞密度的培养物.

二、转染

1.在转染前,确保生存能力大于95%,活细胞密度为(1.5至2.0)x 10 6细胞/mL。

2.将活细胞密度稀释至1.05 x 10 6每毫升细胞数。

3.转化pDNA和PEI引物™ 1 mg/mL试剂容器多次以充分混合。

4.将每mL培养物转移1μg pDNA至一个干净的小瓶中转染。用新鲜培养基(5%最终培养体积)稀释至20μg/mL。

5.将5μL PEI Prime转移到一个干净的小瓶中™ 每毫升1毫克/毫待转染的培养物。使用培养基稀释至75μg/mL(5%最终培养物

体积)。

6.将稀释的pDNA和PEI Prime™混合在一起. 反转几次,然后允许在室温下加盖休息10分钟。轻轻翻转,使用前立即关闭容器

一次。

7.使用10mL pDNA/PEI混合物用于每90mL待培养的培养物转染。一边搅拌一边逐渐将混合物加入培养基中。

8.按照典型条件培养细胞。

三、转染后

如果使用饲料、加强剂、补充剂或增强剂,在转染后6小时可以添加

根据细胞培养基的不同,可能需要添加钠丁酸盐添加到培养基中以获得CHO悬浮液中的基因表达。如有必要,确定,制备5个

转染后的亚培养物,并添加丁酸钠至0、2.5、5、7.5或10mM的最终浓度基于最终产率的适当浓度。如果使用GFP对照,转染效率应超过70%。48小时后观察。对于优化的程序,超过80%的效率是合理的。监测表达水平并在

察到稳定滴度后收获。对于典型的过程,在转染后5至7天分泌的蛋白质将最高。其他工艺,如使用低温和/或使用批进料以获得

最大产量,将改变峰值收获窗口。

更多有关Serochem PEI转染试剂在CHO悬浮细胞上的转染步骤,请联系SeroChem代理——上海金畔生物科技有限公司客服!




Serochem转染试剂品牌代理商

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Serochem公司介绍“”

Serochem致力于提供各种特种化学品,包括抑制剂,原料药,参考标准和其他研究用化学品。该公司凭借经验丰富的科学家和的平台技术,向客户提供广泛的服务,包括定制合成,分析支持,多肽合成和许多其他战略服务解决方案,帮助客户在药物研发和生物医学研究上取得成功。

Serochem转染试剂介绍:

产品名称:PEI Prime™ Powder

品牌名称:Serochem

产品编号:Primer-P100-1G/100mG

产品规格:1g和100mg

产品优势:

与同类PEI产品相比,对CHO细胞系和HEK293细胞系转染效率较高;

价格便宜,适用大规模试验;

毒性较低,利于转染后细胞存活。

产品应用:

DNA转染:探究目的基因的功能和基因表达对细胞健康和生命周期的影响,以及用于获取纯化所用蛋白和下游应用蛋白

RNA转染:基因敲除的研究及后续功能分析

Serochem转染试剂列表:

货号 产品名称 规格
Prime-P100-1G Polyethylenimine   hydrochloride(Transfection Grade) 1g(干粉)
Prime-P100-100MG Polyethylenimine   hydrochloride(Transfection Grade) 100mg(干粉)
Prime-P100-5ml PEI Prime AQ 5ml(溶液)
Prime-P100-100ml PEI Prime AQ 100ml(溶液)
Prime-P100-1ml PEI Prime AQ 1ml(溶液)

  

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Serochem PEI线性转染试剂(液体)代理商

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Serochem PEI线性转染试剂(液体)代理

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Serochem PEI线性转染试剂(液体)介绍:

产品简介:
PEI线性转染试剂(PEI Prime Powder, Transfection Grade Linear Polyethylenimine):PEI Prime是以一种阳离子高分子聚合物-聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)为载体的基因转染试剂。PEI是在pH中性溶液中具有*正电荷密度的合成聚合物。带正电的PEI与带负电的DNA牢固结合,并赋予净阳离子电荷,使DNA进入细胞。PEI Prime是一种高性能转染试剂,利用PEI的特性旨在实现高产量,可重复性和可扩展的瞬时基因表达。

应用范围:

PEI转染试剂能够高效率转染多种细胞系,包括贴壁细胞和悬浮细胞。此外,PEI是用于HEK293和CHO悬浮细胞转染的试剂。PEI转染试剂是生产任何具有成本效益的生物制剂的合适选择,包括重组蛋白,抗体和病毒。

产品优势:

1. 低毒,高效

2. 操作简单,高性价比

3. 可提供可靠、具有可重复性的转染结果

4. 适用于快速、高通量转染流程

转染步骤:

-以HEK293贴壁细胞为例,步骤如下:

1. 细胞接种:细胞密度2-6 x106 cells/mL。

2. 质粒的准备:在5%最终培养体积的DMEM或培养基中,每106个细胞稀释1.0 ug pDNA。

3. PEI的准备:在5%最终培养体积的DMEM或培养基中,每106个细胞稀释3.0 ug PEI Prime,混匀。

4. 通过快速,短暂涡旋或颠倒数次试管,将pDNA和PEI Prime溶液混合在一起。

5. 使pDNA和PEI的混合物在室温下静置10分钟。

6. 一边旋转板,一边将pDNA和PEI混合物逐渐滴加到细胞中。

7. 于37℃ CO2培养箱中培养。

转染的优化:

为达到高转染效率和低细胞毒性的理想结果,可以进行如下优化:

参数

范围

PEI浓度

3.50-6.50mg/(L final culture)

DNA浓度

0.75-1.5mg/(L final culture)

PEI/DNA混匀时间

5.0-15.0minutes

与市场同类品牌的PEI转染效率的对比:

使用PEI Prime(PEI:DNA浓度比3:1)或某国外品牌PEI,用CMV-SEAP质粒转染20ml 含HEK293悬浮细胞的培养物。 转染后5天,使用磷酸酶报告染料和UV / Vis检测SEAP表达水平。数据表示占某国外品牌PEI的SEAP表达水平的百分比。结果显示我们的PEI Prime 的转染效率比国外同类厂家高出40%。

Serochem PEI线性转染试剂(液体)代理——上海金畔生物科技有限公司:

一、辐射五大服务方向:

  1.国内试剂耗材经销代理;

  2.国外试剂订购(直订,或境外代理);

  3.基因组测序(二代,二代+三代);

  4.基因分型(SNP检测):低/中/中 高通量项目;

  5.生物样本运输(国内、);

二、多家代理品牌,涉及30多种较有名品牌,经营代理500多个品牌:

Qiagen、Sigma、R&D、Epigentek、ThermoFisher、DNA Genotek、USA Scientific、Matreya、Sage Science、List Labs、Macrocyclics、Steraloids、NIBSC、mobio、immunodx、cellsystems、medicago、abcam、CST、Roche、Bethyl、sino Biological、clodrosome、adi BIO-WORLD、TOKU-E、HYPHEN BioMed、moltox、ZeptoMetrix、International Humic、biocytex、Toxin Technology  、Streck、Elastin、biomax、Orflo Technologies、Accegen、Advbiomart、genlantis、R&D、Cygnus Technologies LLC、Enzyme Research、Bio/Data Corporation、Greer Lab 、Solarbio、bangslabs、bioline、musechem、Novocastra stemrd、hyphen-biomed、polyplus、moltox 、exiqon、pentapharm、verichemlabs、GenStar、ALZET、lucernatechnologies 、meridian、origene、zimmerpeacocktech、horizondiscovery、Reagents、megazyme、elisasystems………

  所有生物试剂耗材都可以进口,特别是冷门品牌,均能给客户购买到。价格优,货期短,可加急,快10天到货;保证服务质量,所有产品均提供售后服务。大部分客户我们提供货到付款服务,

  公司自成立依靠过硬的服务和良好的信誉与各大企事业单位、科研单位建立长期合作。客户包括北大,清华,地大,中科院各所,各大药企等等。

  专业订购国内外试剂耗材,常备现货,一手货源,欢迎合作。



serochem PEI线性转染试剂(粉末)代理商

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serochem PEI线性转染试剂(粉末)介绍:serochem PEI转染试剂(PEI Prime Powder, Transfection Grade Linear Polyethylenimine):PEI Prime是以一种阳离子高分子聚合物-聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)为载体的基因转染试剂。PEI是在pH中性溶液中具有*正电荷密度的合成聚合物。带正电的PEI与带负电的DNA牢固结合,并赋予净阳离子电荷,使DNA进入细胞。PEI Prime是一种高性能转染试剂,利用PEI的特性旨在实现高产量,可重复性和可扩展的瞬时基因表达。

应用范围:

PEI转染试剂能够高效率转染多种细胞系,包括贴壁细胞和悬浮细胞。此外,PEI是用于HEK293和CHO悬浮细胞转染的试剂。PEI转染试剂是生产任何具有成本效益的生物制剂的合适选择,包括重组蛋白,抗体和病毒。

产品优势:

1. 低毒,高效

2. 操作简单,高性价比

3. 可提供可靠、具有可重复性的转染结果

4. 适用于快速、高通量转染流程

转染步骤:

-以HEK293贴壁细胞为例,步骤如下:

1. 细胞接种:细胞密度2-6 x106 cells/mL。

2. 质粒的准备:在5%最终培养体积的DMEM或培养基中,每106个细胞稀释1.0 ug pDNA。

3. PEI的准备:在5%最终培养体积的DMEM或培养基中,每106个细胞稀释3.0 ug PEI Prime,混匀。

4. 通过快速,短暂涡旋或颠倒数次试管,将pDNA和PEI Prime溶液混合在一起。

5. 使pDNA和PEI的混合物在室温下静置10分钟。

6. 一边旋转板,一边将pDNA和PEI混合物逐渐滴加到细胞中。

7. 于37℃ CO2培养箱中培养。

转染的优化:

为达到高转染效率和低细胞毒性的理想结果,可以进行如下优化:

参数

范围

PEI浓度

3.50-6.50mg/(L final culture)

DNA浓度

0.75-1.5mg/(L final culture)

PEI/DNA混匀时间

5.0-15.0minutes

与市场同类品牌的PEI转染效率的对比:

使用PEI Prime(PEI:DNA浓度比3:1)或某国外品牌PEI,用CMV-SEAP质粒转染20ml 含HEK293悬浮细胞的培养物。 转染后5天,使用磷酸酶报告染料和UV / Vis检测SEAP表达水平。数据表示占某国外品牌PEI的SEAP表达水平的百分比。结果显示我们的PEI Prime 的转染效率比国外同类厂家高出40%。

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