化学发光底物 D-荧光素 D-Luciferin cas2591-17-5的使用方法

荧光素(Luciferin)是常见生物性发光报告基因荧光素酶(Luciferase)在体内成像的底物。作用原理是荧光素酶在Mg2+O2参与下催化荧光素氧化成oxyluciferin,在荧光素的氧化过程中,发出生物荧光(bioluminomescence),然后通过化学发光仪或液闪测定仪测定生物荧光。

目前市场上有三种产品形式,D-荧光素(游离酸),D-荧光素钠盐,以及D-荧光素钾盐。这三种产品主要的差别在于溶解特性上:

D-荧光素(游离酸)水溶性以及缓冲体系的溶解性都很弱,除非溶于弱碱如NaOHKOH溶液。

溶于甲醇(10mg/ml)和DMSO50mg/ml)。

外观:淡黄色固体

熔点:200-204℃

储存:-20℃低温避光保存

结构式

化学发光底物 D-荧光素 D-Luciferin  cas2591-17-5的使用方法

应用:

1)活细胞、组织或生物体内luc标记基因和荧光素酶融合基因体内/体外表达的成像分析;

2)广泛用于报告基因分析,免疫分析和ATP荧光卫生监测分析;

使用方法:

1 体外生物发光检测

11gD-Luciferin Firefly, free acid溶解入33.3ml的无菌水中,配制成30mg/ml的储存液(200×)。混匀后用0.2µm滤膜过滤,然后立即使用或分装于-80℃避光保存,避免反复冻融,冻存的储存液可保存1年。注:D-Luciferin Firefly, free acid储存液也可用弱碱(如 NaOHKOH溶液)或DMSO溶解,用碱性pH溶液去溶解本品,如果有沉淀发生则需要调整pH至更高直至完全溶解。之后可以重新用酸性溶液来中和,调整至所需的pH环境。

2)用完全培养基将储存液按 1:200稀释(储存液:完全培养基1:200),配制成工作液(终浓度150µg/ml)。

3) 成像前,去除培Luciferase表达细胞中的培养基,加入荧光素工作液37℃孵育5min, 然后进行图像分析。

4)工作液应在使用后丢弃。

2 体内活体成像检测

11gD-Luciferin Firefly, free acid66.6mlDPBS(, w/o Mg2+ Ca2+)配制 D-荧光素工作液(15mg/ml),0.2µm 滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-80℃避光保存,避免反复冻融。一旦使用,放到 4℃解冻,保持冰冷且避光,冻存的储存液可保存1年。注:D-Luciferin Firefly, free acid储存液也可用弱碱或DMSOw/o Mg2+)配置。

2) 每只老鼠的注射量取决于老鼠的体重:150mg/Kg

3) 注射入体内 10-15min后,进行成像分析。注:建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线,从而确定信号检测时间和信号平台期。

化学发光底物 D-荧光素 D-Luciferin  cas2591-17-5的使用方法


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D-Luciferin, Potassium Salt(D-萤光素钾盐) 货号: D1009S/D1009L 规格: 10 mg/500 mg

上海金畔生物科技有限公司代理UELANDY荧光染料全系系列产品

D-Luciferin, Potassium Salt(D-萤光素钾盐)

产品货号: D1009S/D1009L

产品规格: 10 mg/500 mg

目录价(元):600/2800

推荐仪器:化学发光仪、小动物活体成像仪、酶标仪

大包装询价


产品概述:

产品参数
外观:可溶于水的浅黄色固体
Ex/Em:328/533 nm
CAS号:115144-35-9
分子式:C11H7N2O3S2K
分子量:
318.4

分子结构图:

D-Luciferin, Potassium Salt(D-萤光素钾盐) 货号:               D1009S/D1009L  规格:               10 mg/500 mg

储存条件
-20℃ 干燥避光保存,有效期见外包装。

产品介绍 

活体成像技术(optical in vivo imaging)目前主要采用生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence)两种技术,生物发光法是基于萤光素酶能催化底物化学发光的原理,将体外能稳定表达萤光素酶的细胞株植入动物体内,与后期注射入体内的底物发生反应,利用光学系统检测光强度,间接反映出细胞数量的变化或细胞的定位。这项技术已被广泛应用于多个领域,最常用的有肿瘤或疾病动物模型的建立,并可用于病毒学研究、siRNA研究、干细胞研究、蛋白质相互作用研究等。
D-Luciferin萤光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍用于整个生物技术领域,特别是体内活体成像技术。在ATP萤光素酶的作用下,萤光素能够被氧化,并且在560 nm检测到其化学发光。Luciferinluc基因编码,该基因作为报告基因在多种细胞中存在。由于化学发光的低背景性,luc基因在很低的表达水平下就可以被监测到。此外,萤光素/萤光素酶被用来测量10-15摩尔量的ATP

D-Luciferin, Potassium Salt(D-萤光素钾盐) 货号:               D1009S/D1009L  规格:               10 mg/500 mg


注意事

1. D-Luciferin, Potassium Salt样品的背景荧光主要来源于萤光素,如果不立即使用本产品,建议分装后,-20℃避光保存。


说明书:

D-Luciferin, Potassium Salt(D-萤光素钾盐) 货号:               D1009S/D1009L  规格:               10 mg/500 mg UE-D1009S/D1009L    
常见问题解答:

底物的激发波长和发射长?

化学发光,无需激发波长。萤火虫光素发射波长是 560 nm。

推荐仪器?多功能酶标仪能用吗?
1、推荐仪器:具有生物化学发光检测模块。光素产生的光可以被光度计或闪烁计数器检测。常见的活体成像仪器:如 IVIS® Lumina 小动物活体成像系统,德国 Bruker公司的 In-Vivo Xtreme 多模式小动物活体成像仪。
2、多功能酶标仪:需要和仪器厂家确认是否具体生物化学发光检测模块。注:不能用荧光显微镜。

底物可以进入活细胞中或者血脑屏障吗?
D-光素约280道尔顿,萤光素的水溶性和脂溶性都非常好,可以通过血脑屏障,胎盘屏障和血液测试屏障,也可以进入活细胞。

活体成像实验,无效果的原因?
成功进行活体成像实验需要以下条件:
1)目的组织或细胞表达光素酶基因;
2)光素底物注射成功;
3)依赖于发光部位的组织厚度。实验不成功,可从上述因素查找,光素酶基因是否表达,光素底物是否未正确注射,及发光部位较深等

产品不小心放在室温下或暴露在光线下了,还可以用吗?
产品在室温下可以稳定保存很多天,因此产品很可能仍然可以正常工作。 为安全起见,我们建议在处理大量样品或珍贵样品之前,先进行小规模阳性对照实验,以确认该产品仍然适用于您的应用。

两者的区别是什么?
光素钾盐和光素钠盐应用上没有差别,两者的差别在于物理性状上如外形和溶解性。钠盐的水溶性高于钾盐。从目前发表的文献来看,钾盐的使用率远高于钠盐,尤其是体内实验,两者功效相同。

活体成像有必要建立光素酶动力学曲线吗?
注射方式,动物类型以及体重等都会影响信号的发射,因此建议每次实验都要做光素酶动力学曲线,确定最佳信号平台期和最佳的检测时间。


使用本产品的文献:

参考文献
1.1,25-Dihydroxyvitamin D Down-regulates Cell Membrane Growth- and Nuclear Growth-promoting Signals by the Epidermal Growth Factor Receptor
应用方向:荧光素酶活性检测:启动子研究

2.Optical imaging of Renilla luciferase reporter gene expression in living mice
应用方向:活体成像

3.Real-time measurements of acetylcholine-induced release of ATP from bovine medullary chromaffin cells
应用方向:高灵敏度 ATP 分析

D-Luciferin, Sodium Salt(D-萤光素钠盐) 货号: D1007S/D1007L 规格: 10 mg/500 mg

上海金畔生物科技有限公司代理UELANDY荧光染料全系系列产品

D-Luciferin, Sodium Salt(D-萤光素钠盐)

产品货号: D1007S/D1007L

产品规格: 10 mg/500 mg

目录价(元):600/2800

推荐仪器:化学发光仪、小动物活体成像仪、酶标仪

大包装询价


产品概述:

产品参数
外观:可溶于水的浅黄色固体
Ex/Em:328/533 nm
CAS号:103404-75-7
分子式:C11H7N2NaO3S2
分子量:302.3
D-Luciferin, Sodium Salt(D-萤光素钠盐) 货号:               D1007S/D1007L  规格:               10 mg/500 mg

储存条件
-20℃干燥避光保存,有效期见外包装。

产品介绍 
活体成像技术(optical in vivo imaging)目前主要采用生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence)两种技术,生物发光法是基于萤光素酶能催化底物化学发光的原理,将体外能稳定表达萤光素酶的细胞株植入动物体内,与后期注射入体内的底物发生反应,利用光学系统检测光强度,间接反映出细胞数量的变化或细胞的定位。这项技术已被广泛应用于多个领域,最常用的有肿瘤或疾病动物模型的建立,并可用于病毒学研究、siRNA研究、干细胞研究、蛋白质相互作用研究等。
D-Luciferin萤光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍用于整个生物技术领域,特别是体内活体成像技术。在ATP萤光素酶的作用下,萤光素能够被氧化,并且在560 nm检测到其化学发光。Luciferinluc基因编码,该基因作为报告基因在多种细胞中存在。由于化学发光的低背景性,luc基因在很低的表达水平下就可以被监测到。此外,萤光素/萤光素酶被用来测量10-15摩尔量的ATP

D-Luciferin, Sodium Salt(D-萤光素钠盐) 货号:               D1007S/D1007L  规格:               10 mg/500 mg


注意事项

1. D-Luciferin , Sodium Salt样品的背景荧光主要来源于萤光素,如果不立即使用本产品,建议分装后,-20℃避光保存。


说明书:

D-Luciferin, Sodium Salt(D-萤光素钠盐) 货号:               D1007S/D1007L  规格:               10 mg/500 mg UE-D1007S/D1007L    
MSDS:

MSDS D1007 D-Luciferin, sodium salt
常见问题解答:

底物的激发波长和发射长?

化学发光,无需激发波长。萤火虫光素发射波长是 560 nm。

推荐仪器?多功能酶标仪能用吗?
1、推荐仪器:具有生物化学发光检测模块。萤光素产生的光可以被光度计或闪烁计数器检测。常见的活体成像仪器:如 IVIS® Lumina 小动物活体成像系统,德国 Bruker公司的 In-Vivo Xtreme 多模式小动物活体成像仪。
2、多功能酶标仪:需要和仪器厂家确认是否具体生物化学发光检测模块。注:不能用荧光显微镜。

底物可以进入活细胞中或者血脑屏障吗?
D-光素约280道尔顿,光素的水溶性和脂溶性都非常好,可以通过血脑屏障,胎盘屏障和血液测试屏障,也可以进入活细胞。

活体成像实验,无效果的原因?
成功进行活体成像实验需要以下条件:
1)目的组织或细胞表达光素酶基因;
2)光素底物注射成功;
3)依赖于发光部位的组织厚度。实验不成功,可从上述因素查找,光素酶基因是否表达,光素底物是否未正确注射,及发光部位较深等

产品不小心放在室温下或暴露在光线下了,还可以用吗?
产品在室温下可以稳定保存很多天,因此产品很可能仍然可以正常工作。 为安全起见,我们建议在处理大量样品或珍贵样品之前,先进行小规模阳性对照实验,以确认该产品仍然适用于您的应用。

两者的区别是什么?
光素钾盐和光素钠盐应用上没有差别,两者的差别在于物理性状上如外形和溶解性。钠盐的水溶性高于钾盐。从目前发表的文献来看,钾盐的使用率远高于钠盐,尤其是体内实验,两者功效相同。

活体成像有必要建立光素酶动力学曲线吗?
注射方式,动物类型以及体重等都会影响信号的发射,因此建议每次实验都要做光素酶动力学曲线,确定最佳信号平台期和最佳的检测时间。


使用本产品的文献:

1.Creating Red Light-Switchable Protein Dimerization Systems as Genetically Encoded Actuators with High Specificity
Zhimin Huang, Zengpeng Li, Xiao Zhang, Shoukai Kang, Runze Dong, Li Sun, Xiaonan Fu, David Vaisar, Kurumi Watanabe,Liangcai Gu
ACS Synth. Biol

2.Antigen Capture and Immune Modulation by Bacterial Outer Membrane Vesicles as In Situ Vaccine for Cancer Immunotherapy Post-Photothermal Therapy
Yao LiKaiyue ZhangYao WuYale YueKeman ChengQingqing FengXiaotu MaJie LiangNana MaGuangna LiuGuangjun Nie , Lei RenXiao Zhao
Small

参考文献:

1.Application of the firefly luciferase reporter gene
应用方向:体外化学发光分析

2.Optical imaging of Renilla luciferase reporter gene expression in living mice
应用方向:活体成像

3.Real-time measurements of acetylcholine-induced release of ATP from bovine medullary chromaffin cells
应用方向:高灵敏度 ATP 分析