几丁质是β-(1,4)连接的n -乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)的均聚物,是原生动物寄生虫溶组织内阿米巴(Eh)和入侵内阿米巴(Ei)囊壁的主要成分。
内阿米巴几丁质合成酶在真菌的囊泡膜而不是质膜上制造几丁质,尽管几丁质合成的化学过程很可能是相同的。然而,核苷酸糖转运体(NSTs)在内阿米巴几丁质合成中的作用尚未确定。
利用Eh的UDP-GlcNAc转运体EhNst3的氨基酸序列,通过BLASTP分析确定了Ei的UDP-GlcNAc转运体(EiNst5)。结果表明,EhNst3和EiNst5的异体表达可以补充YEA4突变体中Yea4p(酿酒酵母的UDP-GlcNAc转运体)的功能,增加细胞壁几丁质含量。与酿酒酵母中的Yea4p相似,Δyea4细胞中myc表位标记的EhNst3和EiNst5定位于内质网。
EiNST5转录本在大肠杆菌体外成囊和氧化应激过程中表达上调。在氧化应激下,EhNST3也出现了类似的上调。
使用基因特异性dsRNA下调EiNst5的表达,可以显著减少大肠杆菌体外囊化过程中的囊肿形成。我们的观察首次表明EhNst3和EiNst5参与了几丁质的合成,也参与了内阿米巴的成囊过程。
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