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标签归档：选择
选择色谱填料孔径的依据(分子大小、分子尺寸、水化半径)
选择色谱填料的时候，一般不会选错填料的键合相(Bonded Phase)种类，但往往会选错孔相关的参数，尤其是孔径。一般色谱填料的孔径是根据目标物的分子大小、分子尺寸、水化半径等性质来选择的，类似于膜过滤中膜孔大小的选择；
一般小分子化合物（＜1KDa，氨基酸，单糖等）选择60Å的孔，大一点的多肽分子（＜3KDa，比伐卢定等）选择100到120Å孔，更大的多肽（＞5KDa，胰岛素等）需要选择200Å或以上的孔，更大分子量的蛋白或抗体的纯化需要选择2000A甚至更大的孔。
孔选择结果的好与坏
一般色谱填料的制造过程会尽量避免过多的小孔，即孔径分布的高斯曲线(Gaussihai Curve)中左边远离平均孔径的那一部分，因为这一部分孔是容易形成对目标物空间位阻(Steric Hindrhaice)的。
孔在色谱过程中重要的表现在于影响目标物的传质作用(Mass Trhaisfer)，理想的孔径大小是大到能让目标物随流动相自由迁移而不受到空间位阻作用，孔与孔之间全部通透，过小的孔和死胡同似的孔都会造成目标物在色谱过程中的传质变差、增加谱带展宽(Bhaid Broadening)，相邻两个峰靠得更近或交叉部分变大，从而影响分析效果或制备时收率(Recovery Yield)降低；更极端时过小的孔径选择会造成死吸附，洗脱时产品收率大幅降低，只有在再生(Regeneration)时才有可能被强洗脱能力流动相洗脱或者碱破坏。
更大的平均孔径可以降低小孔对目标物的空间位阻，提高传质作用效率，分离效果变好；但是物极必反，也不是孔选的越大越好。但是更大的孔在孔容一定的情况下会降低填料的比表面积，有时会导致纯化载量(Capacity)的降低。所以孔径的选择，不在大，合适就好。
上海金畔生物提供各种色谱填料担体产品，现将产品展示如下：
| 硅烷化101白色担体 | 40-60目、60-80目、80-168目 | 按需求提供 |
| 硅烷化102白色担体 | 40-60目、60-80目、80-169目 | 按需求提供 |
| 硅烷化104白色担体 | 40-60目、60-80目、80-170目 | 按需求提供 |
| 硅烷化202红色担体 | 40-60目、60-80目、80-171目 | 按需求提供 |
| 硅烷化玻璃微珠担体 | 40-60目、60-80目、80-172目 | 按需求提供 |
| 硅烷化凝胶渗透色谱担体（01） | 40-60目、60-80目、80-173目 | 按需求提供 |
| 硅烷化试剂BSTFA+TMCS | 40-60目、60-80目、80-174目 | 按需求提供 |
| 硅烷化试剂二甲基二氯硅烷 | 40-60目、60-80目、80-175目 | 按需求提供 |
| 硅烷化试剂六甲基二硅醚 | 40-60目、60-80目、80-176目 | 按需求提供 |
| 硅烷化试剂六甲基二硅烷 | 40-60目、60-80目、80-177目 | 按需求提供 |
| 硅烷化试剂三甲基氯硅烷 | 40-60目、60-80目、80-178目 | 按需求提供 |
| 硅烷化试剂一甲基三氯硅烷 | 40-60目、60-80目、80-179目 | 按需求提供 |
| 硅藻土型色谱载体a | 40-60目、60-80目、80-180目 | 按需求提供 |
| 硅藻土型色谱载体P | 40-60目、60-80目、80-181目 | 按需求提供 |
| 硅藻土型色谱载体Q | 40-60目、60-80目、80-182目 | 按需求提供 |
| 硅藻土型色谱载体R | 40-60目、60-80目、80-183目 | 按需求提供 |
| 硅藻土型色谱载体RA | 40-60目、60-80目、80-184目 | 按需求提供 |
| 硅藻土型色谱载体RZ | 40-60目、60-80目、80-185目 | 按需求提供 |
| 硅藻土型色谱载体S | 40-60目、60-80目、80-186目 | 按需求提供 |
| 硅藻土型色谱载体Z | 40-60目、60-80目、80-187目 | 按需求提供 |
| 红色担体 | 40-60目、60-80目、80-188目 | 按需求提供 |
| 活性铝填料（Alcoa Type F-1 | 40-60目、60-80目、80-189目 | 按需求提供 |
| 活性炭 | 40-60目、60-80目、80-190目 | 按需求提供 |
| 活性氧化铝 | 40-60目、60-80目、80-191目 | 按需求提供 |
| 聚丙烯酰胺单体标液 | 40-60目、60-80目、80-194目 | 按需求提供 |
| 聚四氟乙烯担体 | 40-60目、60-80目、80-195目 | 按需求提供 |
| 凝胶渗透色谱担体01 | 40-60目、60-80目、80-197目 | 按需求提供 |
| 凝胶渗透色谱担体02 | 40-60目、60-80目、80-198目 | 按需求提供 |
| 气色担体Q | 40-60目、60-80目、80-199目 | 按需求提供 |
| 气相色谱担体 | 40-60目、60-80目、80-200目 | 按需求提供 |
| 色谱硅胶 | 40-60目、60-80目、80-201目 | 按需求提供 |
| 色谱硅胶担体 | 40-60目、60-80目、80-202目 | 按需求提供 |
| 201红色担体 | 40-60目、60-80目、80-203目 | 按需求提供 |
| 202红色担体 | 40-60目、60-80目、80-204目 | 按需求提供 |
| 202酸洗红色担体 | 40-60目、60-80目、80-205目 | 按需求提供 |
| 301釉化担体 | 40-60目、60-80目、80-206目 | 按需求提供 |
| 302釉化担体 | 40-60目、60-80目、80-207目 | 按需求提供 |
| 307釉化担体 | 40-60目、60-80目、80-208目 | 按需求提供 |
| 401有机担体 | 40-60目、60-80目、80-209目 | 按需求提供 |
| 上试硅烷化104白色担体 | 40-60目、60-80目、80-210目 | 按需求提供 |
| 上试红色担体 | 40-60目、60-80目、80-211目 | 按需求提供 |
| 石墨化碳黑 | 40-60目、60-80目、80-212目 | 按需求提供 |
| 酸洗101白色担体 | 40-60目、60-80目、80-213目 | 按需求提供 |
| 酸洗102白色担体 | 40-60目、60-80目、80-214目 | 按需求提供 |
| 酸洗201红色担体 | 40-60目、60-80目、80-215目 | 按需求提供 |
| 酸洗6201担体 | 40-60目、60-80目、80-216目 | 按需求提供 |
| 酸洗硅烷化担体GCS 880，AW，DMCS | 40-60目、60-80目、80-217目 | 按需求提供 |
| 酸洗硅烷化铬姆沙伯 | 40-60目、60-80目、80-218目 | 按需求提供 |
| 椰子壳活性炭 | 40-60目、60-80目、80-219目 | 按需求提供 |
| 椰子壳活性炭 20-40mesh | 40-60目、60-80目、80-220目 | 按需求提供 |
| 中性氧化铝 | 40-60目、60-80目、80-221目 | 按需求提供 |
怎样选择细胞培养板？
怎样选择细胞培养板？
细胞培养板是进行细胞培养的重要工具，选择适合的细胞培养板对于细胞的生长和实验结果具有重要影响。那么我们该怎么选择细胞培养板呢？让我们一起来看看吧！
1. 培养板材质：细胞培养板的材质是一个重要的考虑因素。目前市场上主要有塑料和玻璃两种材质的培养板。塑料培养板价格较低且易于使用，而玻璃培养板具有更好的透明度和耐高温的特性。根据实验需要，可以选择适合的材质。
2. 表面涂层：细胞培养板的表面涂层可以影响细胞黏附和增殖。常用的涂层包括凝胶体、胶原蛋白、明胶等。例如，凝胶体涂层可以增加细胞对基质的黏附，有助于细胞的生长和扩增。选择合适的涂层可以提高细胞的生存率和实验结果的准确性。
3. 通气性：细胞培养过程中，细胞需要氧气和二氧化碳的交换。因此，细胞培养板的通气性是一个重要考虑因素。一般来说，培养板的材料应该具有良好的通气性，以保证细胞的正常生长和代谢。
4. 尺寸和孔径：细胞培养板的尺寸和孔径可以根据实验的需要进行选择。常见的尺寸有6孔、12孔、24孔等。对于需要大批量培养的实验，可以选择大孔径的培养板。而对于需要单独培养和处理的细胞，可以选择小孔径的培养板。
5. 特殊应用：一些特殊实验需要特殊设计的细胞培养板。例如，用于细胞迁移或测量细胞侵袭能力的Transwell培养板；用于细胞色素检测的96孔或384孔微孔板等。在选择细胞培养板时，需要考虑实验的具体需求，并选择适合的特殊应用型培养板。
更多有关细胞培养板的选择方法，请联系上海金畔生物科技有限公司：
如何选择合适的DNA提取试剂盒？
如何选择合适的DNA提取试剂盒？
实验室工作中，经常会需要用到纯化的DNA，这时我们通常需要使用一个商业的DNA提取试剂盒对目的DNA进行分离纯化。那么我们该如何选择合适的DNA提取试剂盒呢？让我们一起来看看吧！
一、试剂盒组分
目前大多数DNA提取试剂盒遵循相同的基本步骤: 裂解，柱纯化，洗涤杂质，柱洗脱。然而，不同的盒子在完成每个步骤的方式上有很大的不同。
二、使用的样本类型
不同的DNA来源有不同的试剂盒，从实验室培养的细胞，到临床样本，土壤样本，甚至指纹，也有许多专门用于某些应用的试剂盒。
例如，土壤中的腐殖酸或血液中的血红蛋白会污染纯化的DNA，从而干扰下游的DNA实验（如PCR）。当然，也有一些试剂盒会在进行纯化步骤之前专门去除这些组分。
如果想从PCR或琼脂糖凝胶中纯化DNA，有许多方法可以提高琼脂糖凝胶纯化的回收率。
三、基因组与质粒DNA提取
一般来说，质粒DNA分离要比基因组DNA分离温和。这是因为针对质粒DNA的裂解步骤需要染色体DNA与细胞蛋白片段保持结合，以防止其污染最终的样品。
两种类型的DNA回收都有试剂盒，甚至有可以同时纯化基因组DNA和总RNA的试剂盒。
四、细胞系与生物体
在选择DNA提取试剂盒时，最重要的变量可能是你所使用的生物体。
1. 细菌：
许多试剂盒都有用于细菌DNA分离的不同成分，这些试剂盒之间的主要区别在于细胞是如何被分解的，因为有些细菌比其他细菌更更有挑战性。
例如，形成生物膜的细菌可能比传统的基于去垢剂的方法需要更强的裂解技术。
2. 动物组织：
用于动物组织DNA分离的试剂盒通常具有更温和的裂解技术，因为大多数动物细胞不像细菌细胞那样有细胞壁。
然而，动物组织DNA提取的挑战往往在于选择合适的组织匀浆方法。此外，许多动物DNA纯化试剂盒不使用苯酚/氯仿萃取或乙醇作为沉淀步骤，以减少破坏DNA的风险。
3. 植物：
当涉及到植物DNA分离时，必须考虑到其他一些因素，需要注意污染物的去除。
植物在纯化过程中通常含有未分离的糖，因此，洗涤剂选择性地与DNA结合并从溶液中析出，通常是先将洗涤剂溶解在高浓度的盐溶液中，然后提取DNA。
4. 血液：
由于技术上的许多最新进展，血液DNA分离试剂盒中有多种裂解技术和提取方法可供选择。从血液中分离出的DNA将在很大程度上决定你使用的裂解和提取的类型。
更多有关DNA提取试剂盒的选择问题，请联系上海金畔生物科技有限公司：
如何选择与优化细胞培养基？
如何选择与优化细胞培养基？
培养基选择与优化是细胞培养的重要步骤之一，它直接影响到细胞的生长、增殖和功能表达。那么我们该如何选择与优化细胞培养基呢？让我们一起来看看吧！
一、培养基选择：
1.细胞类型：根据细胞的来源和种类选择合适的培养基。不同类型的细胞有着不同的营养需求和生长特性，因此需要选择能够满足其需求的培养基。常见的培养基有DMEM、RPMI 1640、MEM等。
2.营养需求：细胞通过培养基中的成分来获取所需的营养物质。根据细胞的需求，可以调整培养基的氨基酸、脂类、无机盐等成分的配比和浓度。
3.补充物质：培养基中可以添加一些补充物质来促进细胞生长和扩增，如生长因子、激素、细胞因子等。根据细胞类型和需要，选择并添加合适的补充物质。
4.细胞培养的特殊需求：某些细胞可能对某些特定条件有特殊的要求，比如干细胞可能需要特殊的细胞培养基配方，或者细胞需要在无血清条件下培养。在这种情况下，需要选择相应的特殊培养基。
二、培养基优化：
1.细胞传代选择：在细胞培养的过程中，可以根据细胞的特殊需求选择合适的细胞传代策略。有些细胞需要经常传代以保持其活力和生长状态，而有些细胞则不需要频繁传代。
2.培养条件优化：通过调整培养基中的成分和条件，如温度、pH值、二氧化碳浓度等，来优化细胞的生长环境和扩增效果。
3.细胞生长曲线监测：通过定期监测细胞的生长曲线，了解细胞的增殖速度和生长特性，从而根据需要调整培养条件和策略。
4.细胞分化控制：对于一些需要控制细胞分化状态的细胞类型，可以通过优化培养条件和添加特定因子来控制细胞的分化方向和程度。
培养基选择与优化是细胞培养和扩增的基础，通过合理的培养基选择和优化，可以提高细胞的生长速度、细胞数量和细胞功能稳定性。更多有关培养基的选择与优化问题，请联系上海金畔生物科技有限公司：
如何选择荧光定量PCR中的对照？
如何选择荧光定量PCR中的对照？
对照的目的是对检测的各个环节进行监控，因此我们按照检测的流程对对照进行梳理。那么我们应该如何选择荧光定量PCR中的对照呢？让我们一起来看看吧！
一、阳性对照和阴性对照
阳性对照和阴性对照是指在相同的处理条件下，比如一份已知的感染样品和一份已知的未感染样品，都进行了提取和扩增最终获得了阳性结果和阴性结果。阴阳性对照强调处理过程与样品一致，并且有明确的预期结果。
二、扩增对照
我们通常说的阳性对照和阴性对照指的是扩增试剂盒中附带的不需要提取的阳性对照和阴性对照，更准确的定义应该是扩增阳性对照和扩增阴性对照。扩增阳性对照含有阳性扩增模板，扩增阴性对照应含有阴性扩增模板（基质核酸）。扩增对照只能监控每次扩增过程中的扩增系统是否正常，不能监控采样、提取和每份样品的操作过程。如果是检测RNA样品的检测试剂盒，其扩增阳性对照使用质粒，便无法监控反转录过程。
三、内标（Internal Control，IC）
内标是指在同一反应管中与靶序列共同扩增的一段非靶序列分子。内标有两种形式，一种是使用天然样品中含有的内参基因作为内标，另一种是人工添加的内标。内标的最大特点是与靶序列共同扩增，而其他的对照都是独立扩增。
四、核酸提取对照
可以使用内参基因，假病毒混合基质，灭活病毒混合基质来监控提取到扩增的流程。
五、反转录对照（RT control）
可以使用提取好的RNA内参基因，RNA假病毒混合基质，灭活RNA病毒混合基质来监控反转录到扩增的流程。
无反转录对照（no-RT control）含有除反转录酶以外的所有成分。
更多有关如何选择荧光定量PCR对照的问题，请联系上海金畔生物科技有限公司：
一抗和二抗如何选择？
一抗和二抗如何选择？
一、一抗的有关介绍
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概念
一抗（primary antibody）作为一种免疫球蛋白，能够特异性结合特定蛋白并将其纯化、检测和定量。使用小鼠、大鼠、山羊、兔子以及其他动物作为寄主，可将一抗培育成多克隆（pAb）或单克隆抗体（mAb）。
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实验中的考虑因素
（1）实验种属和类型的确定
※明确实验中的样本种属：如人、鼠、兔等，应该选择物种相同或有交叉反应的抗体。
※明确实验类型：如WB、ELISA、IHC、ICC、FCM 分析等，一般抗体说明书会明确说明该抗体经试验验证适用或不适用于何种分析类型，如未提及也并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而是说明尚未经过此种分析试验验证。
（2）抗体的类型
※单克隆抗体：由单一B淋巴细胞分泌产生的仅识别某一特定抗原表位的、高度均一的抗体。单抗实验过程中可产生极少或无背景染色，同时也可减少与非目的蛋白的交叉反应。
※多克隆抗体：由多个B细胞克隆产生，针对于抗原几个表位的多种抗体混合物。多抗可识别出抗原的微小变异，能产生更强大的抗原检测信号，是涉及变性蛋白质实验首xuan抗体。
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分析样本蛋白的结构性质
选择最合适的抗体还需要分析了解样本蛋白的结构性质，抗体说明书中也有相关免疫原的描述。如检测的是蛋白片段或者特殊的同型物又或是蛋白全长的某一个区域，那么则必须选择用含有此片段域的免疫原制备的抗体。
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抗体宿主物种的选择
一般在用偶联的二抗结合无偶联物的一抗时，一抗宿主动物的物种选择就较为重要。对于IHC而言，应尽可能得选择与样本不同种系物种的一抗，从而可以避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生的交叉反应。比如：检测小鼠样本蛋白，则不要选择小鼠或大鼠源的一抗，最好选择兔源的一抗，那二抗则可选择偶联了检测分子（酶、荧光素、生物素等）的抗兔IgG。
如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况，除IHC外的其它不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法，则抗体宿主物种的影响不大。
二、二抗的有关介绍
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概念
二抗（secondary antibody）可以直接和与靶抗原连接的一抗结合。在一抗与抗原结合后，标记的二抗特异性的结合一抗的Fc端。利用这种相互作用可以使二抗间接地进行检测和纯化靶蛋白（抗原）。
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实验中的考虑因素
（1）种属来源
一般会根据一抗的种属来源来选择相应的抗该物种的二抗。比如：一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则应该是抗小鼠的二抗（山羊或是兔抗小鼠）。
（2）抗体亚型
多克隆抗体一般主要是IgG类免疫球蛋白，相应的二抗为抗IgG抗体；单克隆抗体由于存在不同的亚型和类别，选择二抗时需要根据一抗的类型或亚类相匹配。
二抗又分为完整抗体和抗体片段两种，根据实验来决定使用哪种，主要包括IgG分子完整抗体、Fab片段以及F(ab’)2片段。
tips:
※较小的抗体片段能够更高效地渗透组织，有利于IHC及IF等实验应用；
※采用抗体片段可以减少抗体Fc 部分与细胞上Fc受体之间的非特异性结合，可用于分析Fc受体含量高的特定组织（例如脾）。
（3）种属来源
二抗的选择还与偶联的标记物有关系，二抗可以偶联不同的标记物如酶、荧光素、生物素及同位素等，形成不同的标记抗体。
偶联物的选择会对抗体灵敏度产生极大的影响；生物素偶联物、聚合物的酶促偶联物或荧光偶联物有利于放大信号。
病毒载体在亲和层析填料上的新选择
病毒载体在亲和层析填料上的新选择
亲和层析填料是利用生物分子间所具有的专一性亲和力而设计的层析技术，常用于从复杂性高、难度大的进料流中捕获目标产物,是纯化病毒载体的理性型。但是，病毒载体纯化对亲和层析填料的要求也非常高，主要是由于病毒载体的滴度低、杂质水平高、敏感性强、粒径可变性大，这都给选择哪种亲和层析填料带来了不小的难度，包括层析基质（填料/整体柱/膜/纤维）和配基的选择难度也不小。
一、病毒载体纯化在亲和层析填料选择上的“拦路虎”
1.病毒载体的敏感性性强
在强酸、强碱、高盐、低盐、高剪切等环境条件下，病毒载体高度敏感，这对亲和层析填料的配基的选择带来了难度。亲和层析填料的配基跟目标病毒载体良好结合后，在相对温和的洗脱条件下，才可能避免在纯化过程中病毒颗粒由于PH的变化所导致的感染性丧失的问题。
2. 病毒载体的粒径可变性大
病毒载体的类型不同，大小也不相同，一般大小在20 到 200 nm的范围内，有些病毒载体可能更大，如溶瘤病毒。病毒载体的粒径越大，亲和层析填料的动态结合载量 (DBC)越小，所以需要更大的柱-亲和层析系统来进行纯化，这势必会增加成本。
3. 病毒清洗和消毒的问题
病毒载体的敏感性、粒径的可变性，在去除生物负荷这个问题上，也会产生不小的难度，因为一些用作亲和层析填料的配基是蛋白质或者肽，它们与在线灭菌 (SIP) 方案可能存在不兼容的地方。因此，病毒清洗和消毒对配基的选择上的重要性不言而喻。
二、病毒载体的亲和层析填料的商业化情况
1. 病毒载体的亲和层析填料商业化的挑战
病毒载体的亲和层析填料商业化具有两大挑战：一、目标较大的产物可能会产生较低的产能。因为，目前的亲和填料通常是为抗体的最佳工艺而设计的,粒径大多在 10-15 nm左右，但是许多病毒载体的粒径较大，如腺病毒为90-100nm、 γ – 逆转录病毒为80-100nm，根本无法进入孔内与基球进行结合，导致产能降低。二、亲和层析填料通常必须特定于某种病毒载体，对于 AAV ，还必须是特定的血清型（AAV2、AAV8、AAV9 等）。这就意味着这一类别的填料的应用困难，病毒载体生产商很难使用单一亲和层析填料为一系列载体构建平台纯化工艺。
2. AAV亲和层析填料商业化情况
目前，市面上的AAV亲和层析填料的类型主要有： 血清特异型和非特异型。对于血清特异型，都需要进行优化和筛选，从而找到对血清特异型能很好地与亲和配基结合的填料。
但是病毒载体的情况越来越复杂，就会存在与现有的亲和配基不结合的情况。因此，亲和层析填料的生厂商把眼光又转移到了基于电荷的平台化方法上来，这种方法能降低成本、兼容SIP和CIP工艺、跨血清型灵活。
三、AAV亲和层析填料的新方案
英国Biotoolimics推出了针对AAV的亲和层析填料：ViralPolishTM 5000B，该产品包含双层琼脂糖珠（含惰性外壳），孔径大小受到严格控制，内部多功能配体可快速高容量结合杂质。ViralPolishTM 5000B亲和层析填料专门为温和洗脱条件下，AAV而设计，在不牺牲动态结合载量的情况下提高碱稳定性。
PCR/qPCR耗材选择——颜色篇
PCR/qPCR耗材选择——颜色篇
PCR管/板有多种颜色，如透明色、白色、黄色、蓝色、红色……普通的PCR过程中，管/板的颜色并不会影响PCR的结果，但是在qPCR中，管/板的颜色对于结果是有很大的影响的。
应用于qPCR的耗材，一般是白色或者磨砂的塑料耗材。qPCR在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次PCR循环后产物总量，因此与透明塑料管/板相比，白色或磨砂的管/板在应对荧光时表现更为灵敏，并且结果更加准确。这是因为白色的耗材可以阻止荧光折射出管，达到荧光折射的最小化，将更多的荧光信号反射回检测器，从而增加信噪比，表现为更高的灵敏度；另外，白色管壁也可阻止荧光信号被PCR仪的加热模块吸收或进一步反射，从而可以降低重复实验中的误差，提高准确性。除此之外，在进行qPCR时需使用超透明的管盖或光学密封膜来密封PCR管/板，保证荧光不受干扰；还需要参考qPCR的耗材要求，选择最合适的耗材，达到优的实验效果。
PCR/qPCR耗材选择——材料篇
PCR/qPCR耗材选择——材料篇
目前市场上大多数PCR/qPCR管材选用的是聚丙烯材料。聚丙烯是一种惰性的有机材料，对反应物质的吸收值最小，并且聚丙烯可以承受PCR过程中的温度变化，在经过温度变化后不易变形，因此可以确保获得理想的PCR结果。
在生产过程中，为了保证生物兼容性、纯度以及批次间的一致性，应当使用全新的医学级的分子生物学级别的高品质的聚丙烯作为原料进行生产。有些PCR / qPCR板为了配合高通量机器人的操作，需要具有更高强度的边框来配合机器人的抓取，通常情况下边框的材料使用的是更高强度的聚碳酸酯。
在某些PCR过程中，如数字PCR，对于耗材的选择更为严苛。由于数字PCR使用的是有限稀释检测法，因此在操作配样的过程中如果样品吸附在枪头或管壁上，将会造成样本的缺失，从而造成结果的偏差。对于样本稀缺且珍贵的实验中，低吸附度的耗材可以减少材料的损耗，并且可以保证PCR实验的准确性。因此低吸附度的耗材赢得了研究学者的青睐。
CST抗体选择指南
CST抗体选择指南
很多刚刚开始信号通路研究的朋友，在访问CST网站查找抗体的时候，常常被多个抗体货号和不同的抗体信息所困扰，不知道该如何选择合适的抗体。为此，CST的技术支持团队希望通过这篇文章，系统介绍抗体的相关背景知识，为大家正确选择适合自身研究需要的CST抗体提供帮助。
一、CST抗体的制备工艺
根据抗体制备的原理和方法，主要分为单克隆抗体、多克隆抗体和基因工程抗体三大类。
早期传统的抗体制备方法是将抗原经各种途径免疫动物，由于抗原物质具有多种抗原决定簇，故可刺激产生多种抗各种决定簇的抗体,形成细胞克隆，合成和分泌抗体到血清或体液中，故在其血清中实际上是含多种抗体的混合物，这种用体内免疫法所获得的免疫血清为多克隆抗体（polclonal antibody, Pab），也是di一代抗体。由于这种抗体是不均一的，无论是对抗体分子结构与功能的研究或是临床应用都受到很大限制，因此如何能获得均一性抗体成为关注的问题。
如能将所需要的产生抗体的细胞株系选出并能在体外进行培养即可获得特异的单克隆抗体（monoclonal antibody, Mab），它是由识别一种抗原决定簇y的细胞克隆所产生的均一性抗体，目前很多单克隆抗体大都利用杂交瘤细胞技术产生，这种用杂交瘤技术制备的单克隆抗体可视为第二代抗体。单克隆抗体由于纯度高、特异性强、可以提高在各种抗体应用中检测抗原的敏感性及特异性，已经被广泛采用。
CST的单克隆抗体主要为兔源和鼠源两大类。由于CST在单克隆抗体的细胞克隆筛选和多种应用的验证等方面非常严格，保证了CST单克隆抗体保持着业界的水平。目前，CSTgao品质的抗体被称为XP®（eXceptional Performance）的单克隆抗体，这些抗体无论在效价、应用类型和种属、特异性等方面的表现都更加，也是我们重点推荐的新一代产品。
由于需要研制人源单克隆抗体用于临床治疗，基因工程抗体(genetically engineering antibody)技术在80年代早期兴起。这一技术是将对Ig基因结构与功能的了解与DNA重组技术相结合，根据研究者的意图在基因水平对Ig分子进行切割、拼接或修饰，甚是人工合成后导入受体细胞表达，产生新型抗体，也称为第三代抗体。
基因工程抗体包括嵌合抗体、重构抗体、单链抗体、单区抗体及抗体库等。CST近年来一直致力于新型基因工程抗体的研究并尝试用于治疗性抗体开发，并于2012年*在《Nature Biotechnology》杂志公布的研究进展——A proteomics approach for the identification and cloning of monoclonal antibodies from serum，CST将这种技术称为NG-XMT™技术，这是一种结合了下一代测序技术（NG-sequencing）和蛋白组学技术从抗血清中进行克隆筛选和鉴定的基因工程抗体制备工艺，能够大大提高治疗性单克隆抗体制备的效率。
二、CST一抗（primary antibody）的选择
正确选择CST一抗一般需要如下几个方面的信息：
1）蛋白的名称及亚型：某些蛋白具有多种不同的亚型，如IKK、PKC、p38等，这需要在选择抗体之前确定要研究的蛋白亚型。还有些抗体由于其抗原选择的是不同蛋白亚型共有的肽段区域，是可以同时识别多个亚型的，我们一般都会在抗体的名称中加入（pan）字样来标明，如Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691，就可以识别Akt1、2、3等多个亚型，结果反映的也是所有Akt亚型的总水平。
2）磷酸化修饰位点：由于CST抗体有很多是针对蛋白的磷酸化修饰位点，因此CST抗体的命名往往会在蛋白名称后加上括号来标注，如Phospho-4E-BP1 (Ser65) Antibody #9451，Ser65即此抗体识别的修饰位点，在选择合适的CST抗体用于特定修饰位点研究时，需要特别注意。有关不同修饰位点的功能，可以通过查阅文献确定，或登陆phosphosite.org（目前zui全的蛋白修饰位点数据库）查询，也可以通过点击CST网站该产品页面中的Background（背景知识）来获取。另外，由于有的蛋白存在不同亚型且序列高度同源，而不同亚型的某些磷酸化修饰位点周围的序列*相同，因此CST的某些抗体往往会同时识别不同亚型的相似修饰位点，如Phospho-IKKα/β (Ser176/180) (16A6) Rabbit mAb #2697既可识别Ser176位点磷酸化的IKKα，也可以识别Ser180位点磷酸化的IKKβ，结果反映的也是两者共有的水平。
3）抗体已验证的应用（如WB，IHC，IP等）：CST抗体一般会在出厂前对常见的抗体应用（WB，IHC，IP, ChIP，IF，Flow）进行内部验证，以确定可以满足的不同应用要求。通过验证，达到质检要求的抗体会明确标记，以备参考。一些没有标明的应用，往往是因为经过验证没有达到质检标准而不推荐。比如Acetyl-Histone H3 (Lys18) (D8Z5H) Rabbit mAb #13998可以满足除IF以外的所有其他5种应用，有的客户会认为，既然该抗体可以用于IHC，根据经验推断应该可以用于IF，那么很有可能会浪费很多时间和试剂而不能获得结果。也有一些没有标明的应用，可能是因为我们没有用于检测的样本而没有检测CST不推荐您使用没有标明的应用。可以挑选其他的货号，我们可能有适用于这个应用的更好的其它产品。
另外，一般直接带有偶联物的一抗，只能用于特定的应用，也会明确标记。
4）抗体能够识别的样本种属：CST抗体一般会在出厂前对常见的不同种属目标样本进行内部验证，以确定可以满足的不同种属类型，可以在产品页面的Species-Reactivity一栏中看到（如人、小鼠、大鼠等）。通过验证，达到质检要求的种属会明确标记，以备参考。对于有些抗体，在 Species-Reactivity 的种属里，有些种属会加上括号，这表示根据序列同源比对，是100%符合的，但是我们并没有做过关于这些种属的实验，所以不建议使用。
一些没有标明的种属，也有可能是可以应用的，建议通过联系CST技术支持来获得相关抗原序列比对的信息，以确定是否可以用于该种属的样本。
5）CST制备抗体的抗原：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片段、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，CST抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片段或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。不同类型的抗原对所得到的抗体会对其应用产生一定影响。CST科学家一般都会对抗体制备所用的抗原进行说明，并对抗体的各种常规应用在出厂前进行验证，以确定该抗体能够满足的应用。
6）抗体的动物来源：CST一抗（primary antibody）的动物来源多为兔（rabbit）和小鼠（mouse），动物来源和单/多抗信息可通过产品名称和产品页面或说明书的Source / Purification得到。由于很多抗体的应用（如IHC，IF等）需要通过第二抗体（二抗）的进一步结合和信号放大，而第yi抗体是通过特定抗原免疫动物而获得，产生抗体的动物来源也决定着第二抗体的选择。一般说来，在使用无偶联物的一抗时，一抗宿主动物的物种选择较为重要，对于免疫组化而言，尽可能选择与样本不同种系物种的一抗，从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应，例如：检测小鼠样本蛋白，则不应选择小鼠或大鼠源的一抗，选兔源的一抗。
7）抗体的克隆号（如D6B6）：CST的某些抗体会含有克隆筛选过程中确定的原始克隆位置编号信息，如Phospho-EGF Receptor (Tyr1173) (53A5) Rabbit mAb #4407中的53A5就是原始的克隆号。这些信息一般对于抗体选择没有太大的影响，只是当同样的修饰位点有不同的克隆来源时，用克隆号标注以示来源不同。
8）抗体的规格：CST抗体一般有3种规格，分别是40 µl ( 4 western blots )、100 µl ( 10 western blots ) 和300 µl ( 30 western blots )。zui为常见的是100 µl ( 10 western blots )。10 western blots 代表该抗体可以做 10 次标准 western blots 膜的孵育，即大约可做100个样本。具体计算如下：该抗体用于 WB 的稀释比例为 1:1000，我们假定一张膜多用 10 ml 一抗工作液孵育，那么，需用 10ml 的 TBST, 按照说明书上建议的 5%BSA 或者 5% non-fat milk, 加入 10ul 的抗体配置成一抗工作液。因此，100ul 一抗原液可用于 10 次 western blots。
以查找ISG15抗体为例，先登陆CST公司网站，然后在 Search方框里输入ISG15，会出来#2578和#2743这两个抗体，让我们看一下它们的区别：#2758 是个兔单抗，括号里的 22D2 代表克隆号，可以做的实验是 Western(免疫印迹)、IP(免疫沉淀)，可应用的种属是 H(人)和 Hr(马)；#2743 是个兔多抗(可查看产品信息页面“Source / Purification”部分)，可以做的实验是 Western、F( 流式细胞术 )、E-P( 以肽为包被抗原的 ELISA)，应用的种属是 H、M(小鼠)、Mk(猴子)。如果说你要做 Western，所用的样本来自人，那么这两个抗体都是可以的。
三、CST二抗（secondary antibody）的选择
二抗的选择先要考虑一抗的物种来源，例如：如果选择的一抗是小鼠的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。其次，二抗的选择要考虑具体的应用类型，CST提供的二抗根据不同的应用分为两大类：酶联（HRP或AP偶联）二抗（免疫印迹和免疫组化应用）和荧光二抗（免疫荧光和流式应用）。
二抗连接的标记酶多为辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP），标记酶通过生化反应与其底物产生有颜色的沉淀物，从而显示目的蛋白的位置和含量，一般常见各种底物信息如下：
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辣根过氧化物酶 Horseradish peroxidase（HRP） |
碱性磷酸酶 Alkaline phosphatase（AP） |
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AEC (red) |
Fast red（pink） |
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DAB (brown) |
INT (yellow/ brown) |
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NBT (brown/ purple) |
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New Fuchsin (red) |
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TNBT (purple) |
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Vega red (pink) |
而荧光标记物用特殊波长的光激发时发射出可见光，CST采用的荧光标记物多为Alexa Fluor®系列染料，分别为Alexa Fluor®488、555，594和647。另外，CST还具有非可见光区的染料偶联抗体，主要使用的Dylight系列染料，分别为DyLight™680和DyLight™800 Conjugate。这些荧光染料的激发光和发射光波长信息如下。
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大激发波长 |
大发射波长 |
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Alexa Fluor® 488 |
490nm |
525nm |
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Alexa Fluor® 555 |
555nm |
580nm |
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Alexa Fluor® 594 |
590nm |
617nm |
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Alexa Fluor® 647 |
650nm |
665nm |
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DyLight™ 680 |
692nm |
712nm |
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DyLight™ 800 |
777nm |
794nm |
CST还有一些特殊的二抗用于特定的应用，如构象特异性或单链特异性二抗，是为了防止在免疫沉淀（IP）这一应用中二抗与微珠结合的抗体在后续的WB检测中发生交叉反应而特别设计的。
阴性选择的人T细胞
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详情介绍
product name：Human T Cells-Negatively Selected(阴性选择的人T细胞)；
cat no：ABC-TC3830；
Size/Quantity：1 vial；
Biosafety Level：1；
Shipping Info：Dry Ice；
Storage：Liquid Nitrogen；
Description：Human T Cells-Negatively Selected (HTC,阴性选择的人T细胞) are purified from healthy donors and ready to use in studies of T cell biology. HTC can respond to mitogens or anti-CD3 antibodies with robust proliferation and secretion of IFNγ, tumor necrosis factor α and interleukin-6.
HTC are cryopreserved immediately after isolation and purification to ensure preservation of all circulating T cell subpopulations and antigen specificities. Our HTC are quality tested via flow cytometry to ensure depletion on undesired cell types and are typically ≥80% CD3 positive. HTC are positive for CD3 and contain both CD4 and CD8 subsets. HTC are negative for other lineage markers such as CD14, CD19 and CD56；
Quality Control：All cells test negative for mycoplasma, bacteria, yeast, and fungi；
Application：For research use only.