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碧云天脂质氧化MDA检测试剂盒(S0131S)产品介绍

碧云天脂质氧化MDA检测试剂盒(S0131S) (Lipid Peroxidation MDA Assay Kit)采用MDA和TBA反应生成红色产物的显色反应，通过比色法定量检测血浆、血清、尿液、动植物组织或细胞裂解液中的MDA含量。该试剂盒广泛应用于脂质氧化水平的检测。

MDA是生物体脂质氧化的自然产物，在氧化应激时产生。脂质氧化导致脂肪酸逐渐分解为多种化合物，包括MDA。通过检测MDA水平，可以评估脂质氧化程度，因此MDA测定被广泛应用于脂质氧化的评估。虽然生物体内其他生化反应也会产生MDA，例如thromboxane synthase的催化作用，但通过适当的对照设置，可以准确观察脂质氧化水平的变化。

本试剂盒中采用了特殊的抗氧化剂，可以有效地抑制样品在检测过程中产生新的MDA，使检测更加准确。同时本检测试剂盒在检测过程中可以把部分MDA天然形成的聚丙二醛分解成MDA，使对脂质氧化的测定更加准确。

本试剂盒可以检测低达1μM的MDA，也可检测高达200μM的MDA。血浆、血清样品中的MDA含量通常在约2-4μM，尿液中的MDA含量通常在约5-30μM，在本试剂盒的检测范围内，可以直接用本试剂盒检测血浆、血清、尿液样品等。

使用说明：

1. 样品的准备：

a. 血浆、血清或尿液样品制备后可以直接用于MDA测定。

b.对于组织，组织重量占匀浆液或裂解液的比例为10%；对于细胞，每100万细胞使用0.1ml裂解液或匀浆液。匀浆或裂解后，10,000g-12,000g离心10分钟取上清用于后续测定。对于一些特殊样品，离心不能获得澄清的上清溶液的，可以使用0.2微米孔径的过滤器过滤以获得澄清的样品溶液。匀浆或裂解等样品制备步骤宜在冰浴或4℃进行操作。

c. 对于组织或细胞样品，样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的MDA含量。

2. 试剂盒的准备工作：

TBA储存液的配制：称取适量TBA，用TBA配制液配制成浓度为0.37%的TBA储存液。例如18.5mg TBA用5ml TBA配制液配制，或者25mg TBA用6.76ml TBA配制液配制，最终浓度即为0.37%。TBA配制液需wan全溶解后再使用，可以加热到70℃以促进溶解。TBA储存液较难溶解，需加热到70℃，并通过剧烈Vortex以促进溶解。配制好的TBA储存液室温避光保存，至少3个月内有效。

标准品的稀释：取适量标准品用蒸馏水稀释至1、2、5、10、20、50μM，用于后续制作标准曲线。如果样品中MDA的浓度很高，可以增加100、150和200μM的标准品浓度。

3. 样品测定:

a. 在离心管或其它适当容器内加入0.1ml匀浆液、裂解液或PBS等适当溶液作为空白对照，加入0.1ml上述不同浓度标准品用于制作标准曲线，加入0.1ml样品用于测定；随后加入0.2ml MDA检测工作液。

b. 混匀后，100℃或沸水浴加热15分钟。加热时务必注意避免液体暴沸溅出。如果使用加热块(Heat block)进行加热注意用重物压紧离心管盖；如果使用沸水浴，则需使用可把盖子锁死的离心管或螺旋盖离心管，或用Parafilm封住离心管口，用针头刺一小孔。zui方便和准确的加热方法是使用带有热盖并可以加热0.5ml PCR管的PCR仪。
c. 水浴冷却至室温，1000g室温离心10分钟。取200微升上清加入到96孔板中，随后用酶标仪在532nm测定吸光度。如果不方便测定532nm的吸光度，也可以测定530-540nm之间的吸光度。可以设定450nm为参考波长进行双波长测定。
d. MDA含量的计算：对于血浆、血清或尿液等样品可以直接根据标准曲线计算获得MDA的摩尔浓度，对于细胞、或组织样品，计算出样品溶液中的MDA含量后，可以通过单位重量的蛋白含量或组织重量等来表示最初样品中的MDA含量，例如μmol/mg蛋白或μmol/mg组织。

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