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神经母细胞瘤条件重编程培养基

产品名称：原代神经母细胞瘤条件重编程培养基(Human Neuroblastoma Conditional Reprogramming Medium)
产品说明：原代神经母细胞瘤条件重编程培养基（Human Neuroblastoma Conditional Reprogramming Medium）是一种为促进人源神经母细胞瘤原代细胞体外生长而开发的培养基。它是一种无菌的液体混合系统，含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质等。该培养基产品基于碳酸氢盐的缓冲体系，在5%CO2、37℃培养箱中平衡时，pH值为7.4。该培养基的配方可以提供一个理想人源神经母细胞瘤原代细胞体外培养环境，选择性地促进体外人源神经母细胞瘤原代细胞的生长。实现了体外培养周期短、成本可控、操作便捷的目的，提高了肿瘤组织原代细胞培养成功率。

产品优势：
(1) 培养成功率高

(2) 体外持续扩增

(3) 保持肿瘤原始病理特征

(4) 药敏结果宇临床数据接近

使用说明
◉使用前准备
(1) y射线照射过的NIH-3T3细胞（40Gy辐照）。
(2)15mL无菌离心管、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入超净工作台中紫外照射30min。提前30min从4℃冰箱取出原代细胞培养基平衡至室温。
◉神经母细胞瘤原代细胞培养
（1）获取的人源神经母细胞瘤原代细胞，按照表1中细胞数接种在合适的培养器皿中，加入y射线辐照后的NIH-3T3细胞（添加滋养细胞数量如表1和表2所示）。
（2）原代细胞初次接种后2~3天勿动（利于细胞贴壁），培养过程中若培养基颜色变黄但细胞未长满时可进行半换液。
（3）镜下观察细胞未长满但3T3细胞已不足时，适量补充γ 射线辐照后的3T3细胞（一般补加初始数目的一半）。

注∶针对实体瘤样本，细胞粒径大于12微米进行计数;倍增时间>48小时则定义为增殖较慢的细胞;对于增殖较快细胞，可以综合倍增时间、接种器皿的规格以及培养周期来估算接种的细胞数量;表格供参考，具体实验具体对待。
◉神经母细胞瘤原代细胞传代
（1）镜下观察细胞形成克隆及神经元样细胞增殖，且汇合度85~95%时即可传代。
（2）培养箱中取出细胞，弃旧培养液，0.05%胰酶洗涤5秒后吸尽，再加入适量0.05%胰酶，37℃孵育，2~5 min后拿出轻拍培养瓶/板侧面，显微镜下观察细胞消化情况。
（3）细胞消化至细胞变圆并开始脱落时用原代细胞终止培养基终止消化，并将细胞转移至离心管中，1500 rpm,3 min。
（4）弃上清，以1~5mL条件培养基重悬细胞，活细胞计数，将细胞悬液按适合的细胞密度接种于培养瓶/板，加入y射线辐照后的NIH-3T3细胞（不同规格培养瓶/板底面积、接种原代细胞数量、添加滋养细胞数量如表1、表2 所示），补加条件培养基至所需体积，十字交叉混匀，培养容器75%表面消毒后置37℃、5%CO2培养箱培养。其他步骤同上。
注意事项：
1.本产品在使用前需平衡至室温。
2.本产品中含有胎牛血清和原代细胞专用抗生素，如无特别需要不用额外再添加血清和双抗，可直接使用。
3.样本需为肿瘤组织，且肿瘤细胞比例越高（>50%），培养成功率越高。
4.为保持本产品的理想使用效果，不宜将其过夜放置于室温或较高的温度环境中。
5.请于保质期内使用本产品，超出保质期，必须放弃使用。
6.原代细胞初次接种时会贴壁较慢和贴壁不牢，若无必要，尽量减少取出观察的次数，建议2~3天一次。
7.传代消化时切记不要消化过度，不宜超过5min，对细胞造成损伤，影响细胞状态。
8.接种细胞时注意细胞密度，不可过稀或过密。
9.使用产品时应注意无菌操作，避免污染。
10.本产品仅用于科研用途，不能用于体外诊断。