免疫比浊法和ps聚苯乙烯纳米微球的制备方法

免疫比浊法（Turbidimetric inhibition immuno assay）是抗原抗体结合动态测定方法。其基本原理是：当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度。当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。

分类

1.免疫透射比浊法 ：抗原抗体结合后，形成免疫复合物，在一定时间内复合物聚合出现浊度。当光线通过溶液时，可被免疫复合物吸收。免疫复合物量越多，光线吸收越多。光线被吸收的量在一定范围内与免疫复合物的量成正比。利用比浊计测定光密度值，复合物的含量与光密度值成正比，同样当抗体量一定时，光密度值也与抗原含量成正比。本法较单向琼脂扩散试验和火箭电泳等一般免疫化学定量方法敏感、快速简便，但要求免疫复合物的数量和分子量达到一定高度，否则就难以测出。

2.免疫散射比浊法 ：一定波长的光沿水平轴照射，通过溶液使遇到抗原抗体复合物粒子，光线被粒子颗粒折射，发生偏转，光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物颗粒大小和多少密切相关。散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测抗原越多，形成的复合物也越多，散射光也越强。散射光的强度还与各种物理因素，如加入抗原或抗体的时间、光源的强弱和波长、测量角度等密切相关。散射比浊法又分为速率散射比浊法和终点散射比浊法。

3.免疫胶乳比浊法 ：胶乳比浊法即是将待测物质相对应的抗体包被在直径为15－60nm的胶乳颗粒上，使抗原抗体结合物的体积增大，光通过之后，透射光和散射光的强度变化更为显著，从而提高试验的敏感性。

直径为15－60nm的胶乳颗粒常见：聚苯乙烯。

注意事项

抗体（Ab）与可溶性抗原（Ag）反应，形成一定结构的免疫复合物，成为悬浮于反应溶液中的微粒。在沉淀反应中形成的复合物微粒具有特殊的光学性质，可用仪器检测，提高了检测的速度、灵敏度和易操作性。

免疫比浊测定注意事项：

1、抗原或抗体量大大过剩，可出现可溶性复合物，造成误差。

2、应维持反应管中抗体蛋白始终过剩。

3、易受到脂血的影响。

发展历程

早期免疫分析通过观察沉淀物形成，凝集及溶血现象发生来分析，如免疫扩散、免疫电泳、血凝试验、补体结合等。

上世纪50年代末60年代初，利用AG-AB复合物形成使浊度改变，再用比浊计来比浊，但因其敏感性差未被接受。

70年代初，开始有自动检测系统，但因其用的是激光为光源，固定波长，灵敏度较低，而且时间一般要2—3小时，很难满足临床需要。

70年代末，速率比浊计的出现，使抗原抗体结合的反应在几十秒内出结果，可以说是免疫化学测定的革命性的发展。

随着标记技术的发展，免疫化学纳入临床化学检验范畴。

脱硫剂在脱硫过程中所发生的反应是气固反应，在反应过程中都涉及到复杂的气固传质过程，聚苯乙烯微球可作为脱硫剂制备中的造孔剂，但是目前的技术问题是很难制作出连续均匀的聚苯乙烯纳米微球。

聚苯乙烯纳米微球的制备方法

将十二烷基硫酸钠和一定量去离子水在室温下加入四颈烧瓶中，搅拌混合液至澄清后，加入NaOH/NaHCO3的缓冲溶液和苯乙烯，搅拌2h后快速升温至80℃，在此过程中匀速滴加过硫酸钾溶液，控制滴加时间30min，滴加完毕后恒温反应8h即可得到白色浆状物的聚苯乙烯微球乳液。

所使用的化学材料为：

苯乙烯（液态、级别：分析纯）、过硫酸钾（固态、级别：分析纯）、氢氧化钠（固态、级别：分析纯）、十二烷基硫酸钠（固态、级别：分析纯）、碳酸氢钠（固态、级别：分析纯）。

方法一：

1，取氢氧化钠和碳酸氢纳各0.1g+0.001g配成复合缓冲溶液。

2，取过硫酸钾0.45g±0.001g去离子水20ml±0.1ml，加入烧杯中，搅拌均匀，配成0.1mol/L 的过硫酸钾水溶液。

3，取十二烷基硫酸钠 1g±0.001g，去离子水500ml+0.1ml在室温下加入一个1000mL的四颈烧瓶中，搅拌混合液至澄清后，取氢氧化钠和碳酸氢纳缓冲溶液10ml和苯乙烯3ml，搅拌2h后快速升温至80℃，在此过程中匀速滴加过硫酸钾溶液10ml +0.1ml，控制滴加时间30min，滴加完毕后恒温反应8h，停止搅拌与加热，待自然冷却至常温即可得到白色浆状物的聚苯乙烯微球乳液，乳液中的微径平均为50nm。

方法二：

1，取氢氧化钠和碳酸氢纳各0.1g+0.001g配成复合缓冲溶液。

2，取过硫酸钾0.45g±0.001g去离子水20ml±0.1ml，加入烧杯中，搅拌均匀，配成0.1mol/L 的过硫酸钾水溶液。

3，取十二烷基硫酸钠1 g±0.001g，去离子水500ml+0.1ml在室温下加入一个1000mL的四颈烧瓶中，搅拌混合液至澄清后，取氢氧化钠和碳酸氢纳缓冲溶液10ml和苯乙烯5ml，搅拌2h后快速升温至80℃，在此过程中匀速滴加过硫酸钾溶液10 ml +0.1ml，控制滴加时间30min，滴加完毕后恒温反应8h，停止搅拌与加热，待自然冷却至常温即可得到白色浆状物的聚苯乙烯微球乳液，乳液中的微径平均为60nm。

wyf 04.12