上海金畔生物科技有限公司代理UELANDY荧光染料全系系列产品
YF®488 Click-iT EdU 流式检测试剂盒(绿色荧光)
产品货号: C6019S/C6019M/C6019L
产品规格: 5T/20T/50T
目录价(元):431/1326/2947
推荐仪器:流式细胞仪
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产品概述:
产品货号及规格
货号
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产品名称
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规格
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C6019S
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YF® 488 Click-iT EdU 流式检测试剂盒(绿色荧光)
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5T
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C6019M
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20T
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C6019L
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50T
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C6020S
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YF® 555 Click-iT EdU 流式检测试剂盒(橙红色荧光)
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5T
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C6020M
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20T
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C6020L
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50T
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C6021S
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YF® 594 Click-iT EdU 流式检测试剂盒(红色荧光)
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5T
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C6021M
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20T
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C6021L
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50T
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C6022S
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YF® 647A Click-iT EdU 流式检测试剂盒(远红荧光)
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5T
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C6022M
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20T
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C6022L
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50T
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产品内容
规格
组分
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5T
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20T
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50T
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开封后保存温度
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稳定性
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A. 10 mM EdU
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100 µL
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0.4 mL
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1 mL
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-20℃
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开封后按指定温度保存可有效放置一年
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B. YF® 488/555/594/647A Azide
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25 µL
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100 µL
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250 µL
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-20℃,避光
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C. 10× Click-iT EdU反应缓冲液
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500 µL
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2×1 mL
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5 mL
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2-8℃
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D. CuSO4
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200 µL
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0.8 mL
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2× 1 mL
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2-8℃
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E. Click-iT EdU缓冲液添加物
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15 mg
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60 mg
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150 mg
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2-8℃
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规格:上述反应次数针对6孔板培养的细胞,不同容器的具体用量可参考附表1。
荧光光谱数据:YF® 488 Azide:495/519 nm;YF® 555 Azide:555/565 nm;
YF®594 Azide:590/617 nm;YF® 647A Azide:650/670 nm.
储存条件
-20℃避光保存,有效期见外包装。开封后,保存温度详见说明书。
产品介绍
细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿瘤药物效果的基础实验手段。检测细胞增殖最精确的方法是BrdU法。EdU法检测试剂盒是BrdU法的革命性突破。EdU(5-乙炔基-2’-脱氧尿苷)是一种嘧啶类似物,在DNA合成期整合入DNA双链。EdU法检测基于“点击”反应,一种由铜催化的叠氮化合物和炔烃作用发生共价反应,形成共价键。
本试剂盒中,EdU含有炔烃,YF® 488/555/594/647A Azide染料含有叠氮化合物。点击法的EdU标记增殖快速有效,易于使用。BrdU方法需要DNA变性(如酸变性、热变性或者用DNase消化)暴露出BrdU,方便BrdU抗体结合;而EdU法只需多聚甲醛固定和Triton X-100促渗就可以使检测试剂进入细胞, 只需少量的叠氮化染料即可非常有效地标记出整合的EdU。
本试剂盒包含EdU法检测所需要的所有组分,可以用于体外培养细胞的增殖检测。
注意事项:
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2. 荧光染料均存在淬灭问题,实验操作时请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
3. Click-iT EdU缓冲液添加物溶液最好现配现用,以保证最佳结果。
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
说明书:
UE-C6019S/C6019M/C6019L
常见问题解答:
◆YF®488/555/594/647有什么区别?
主要就是检测EDU的物质带的荧光基团不同,检测时发射荧光的颜色不同。实验效果相同,可根据偏好或需求进行选择。
◆EdU试剂盒中,固定后3% BSA in PBS的作用是什么?
清洗步骤中,BSA可以终止掉未反应的甲醛。
◆能否在活细胞中进行Click-iT EdU检测?
不可以。虽然EdU是对活细胞进行代谢标记,但是叠氮化物检测试剂和缓冲液组分是细胞非透过型,检测信号时的Click反应必须在固定和通透的样品上进行。
◆质粒转染表达的荧光蛋白检测与Click反应兼容吗?检测顺序是什么?
本产品会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光,故染色后无法直接检测GFP,建议使用GFP抗体间接检测。
◆观测到较高的本底干扰,这是什么原因所致?如何减少本底干扰?
叠氮化物和炔烃类间Click反应非常有选择性,生物体内几乎不可能有副反应发生,所以本底较高一般是由洗涤不充分造成的。减少本底干扰的最佳方法是增加BSA洗涤的次数。同时,也可在同样的检测条件下设置一组同等处理的无染料或无Click反应对照,以排除自发荧光干扰。此外,您还可在无EdU 体系中进行完整的Click反应,验证Click反应信号的特异性。
◆为什么标记样品无信号或特异性信号非常低?如何提高信号?
1.请保证试剂使用时为无色的状态,不要使用已经变黄的添加剂或缓冲液;
2.为确保Click反应试剂能够到达核内,细胞需要充分地固定和通透;
3.由于铜离子能结合到部分试剂上,这会导致催化Click反应的有效浓度降低。所以在Click反应前,不要在任何缓冲液或试剂中引入金属螯合剂(例如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等),对某些含有这些物质的实验样品来说,进行Click反应前,可能需要增加额外的洗涤步骤;
4.当铜离子在合适的化合价时,Click反应才有效。Click反应中用到的铜离子为二价铜(Cu2+)。
5.延长Click反应的时间至超过30分钟也并不会提高信号。建议使用新鲜的Click反应试剂再次进行30分钟的孵育,可更有效地提高标记效率。
◆如何对细胞核进行复染?
试剂盒中配有Hoechst 33342,可以在Click反应后用于细胞核的染色,也可选择使用DAPI。
◆可以用于检测植物细胞核内的DNA复制吗?
可以。EdU是小分子,可以穿透植物细胞的细胞壁。