上海金畔生物科技有限公司代理UELANDY荧光染料全系系列产品
YF®594 TUNEL 细胞凋亡试剂盒（红色荧光）
产品货号: T6014S/T6014L
产品规格: 20T/50T
目录价（元）:1105/2211
推荐仪器：荧光显微镜（主推）、流式细胞仪
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产品概述：
产品货号和产品规格：
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产品货号 |
产品名称 |
Ex/Em (nm) |
产品规格 |
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T6013S |
YF®488 TUNEL细胞凋亡试剂盒 （绿色荧光） |
490/515 |
20T |
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T6013L |
50T |
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T6039S |
YF®555 TUNEL细胞凋亡试剂盒 （橙红色荧光） |
555/565 |
20T |
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T6039L |
50T |
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T6014S |
YF®594 TUNEL细胞凋亡试剂盒 （红色荧光） |
590/617 |
20T |
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T6014L |
50T |
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T6063S |
YF®640 TUNEL细胞凋亡试剂盒 （远红荧光） |
642/662 |
20T |
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T6063L |
50T |
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T6067S |
Cy3 TUNEL细胞凋亡试剂盒 |
555/565 |
20T |
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T6067L |
50T |
产品内容：
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规格 组分 |
20T |
50T |
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A. TUNEL Equilibration Buffer |
2×1 mL |
5 mL |
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B.YF®488/555/594/640/Cy3 TUNEL Reaction Buffer |
1 mL |
2 × 1.25 mL |
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C. TdT Enzyme |
20 μL |
50 μL |
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D. Proteinase K (2 mg/mL) |
40 μL |
100 μL |
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E. DNase I (2 U/μL) |
5 μL |
13 μL |
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F. 10 × DNase I Buffer |
100 μL |
260 μL |
储存条件
-20℃保存，组分B需避光，避免反复冻融。有效期见外包装。
产品介绍
细胞发生凋亡时, 会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA，产生180 bp-200 bp的 DNA 片段，表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现的特异的梯状Ladder图谱。基因组DNA双链或单链断裂时会出现产生大量的粘性3′-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的催化作用下，与YF®/Cy-dUTP结合，从而通过荧光显微镜或流式细胞仪直接进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（Terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL）。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3′-OH形成，很少能够被染色。Tunel法可以对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征，可检测出极少量的凋亡细胞，因而在细胞凋亡的研究中广泛采用。
本试剂盒应用范围广，可用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。可选择性的检测凋亡细胞，而非坏死细胞或因辐照和药物治疗而造成的 DNA 链断裂的细胞。本试剂盒检测细胞凋亡，耗时短，只需一步染色反应，洗涤后即可检测。
注意事项
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。
2. 组分A和B使用时请佩戴口罩、手套，如接触皮肤，请立即用大量水冲洗。
3. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
说明书：
UE-T6014S/T6014L
MSDS：
MSDS T6013 6039 6014 6063 6067 YF®488 555 594 640 Cy3 TUNEL Apoptosis Kit
常见问题解答：
◆为什么出现了一些非特异标记？
1. 有些细胞或组织，比如平滑肌核酸酶或聚合酶活性水平较高，使得DNA全部被切断，易导致假阳性。建议：取出细胞或组织后要立即固定并充分固定，以阻止这些酶的活性，同时设置阴性对照。
2. 内源性过氧化物酶影响，建议：对于肝脏、肾脏等血细胞含量多的组织，适当延长封闭时间和升高过氧化氢的浓度。
3. 固定液浓度过高或过低，导致组织中心部分固定效果不佳，而使得中心部细胞自溶、DNA链出现不规则断裂，产生假阳性。建议：推荐使用4%多聚甲醛。
4. TdT 酶反应时间过长或Tunel反应过程中反应液发生蒸发或渗漏，细胞或组织表面不能保持湿润。注意控制反应时间，并确保TdT 酶反应液能很好地覆盖样品。
5. 石蜡、脂肪、血液、体液等都较易与染料结合，所以组织切片制作时要保持干净、脱蜡要彻底。
6. 有些试剂或细胞存在自发荧光，选择染料时要避开自发荧光的颜色。
◆为什么没有染上荧光？
1. 固定不充分。固定液首选4%多聚甲醛，现用现配。不建议使用乙醇，乙醇固定液对组织的渗透力较弱，影响TUNEL标记效率.
2. 细胞膜和核膜的通透不充分，TdT酶未能到达核内。细胞与冰冻切片，可用0.2% Triton X-100溶液通透5-30min，石蜡切片推荐使用蛋白酶K，37℃通透30 min；不同的细胞和组织所需要的通透时间略有不同，时间太长容易脱片，适当调整。
3. 延长标记时间至2h，并适当增加TdT酶及dUTP的用量。
4. 确定实验对象细胞有凋亡。准备一份DNase I处理的阳性对照，验证TdT酶反应是否正确进行。
◆如何对细胞核进行复染？
可在TUNEL反应结束后对细胞核进行染色。
◆为什么荧光背景高？
1. 支原体污染：可以使用支原体染色检测试剂盒验证。
2. TdT 酶反应时间过长，可以用试剂盒提供的TdT酶稀释液将TdT酶稀释2-5倍后再按照说明书操作，稀释后的TdT酶仅供当日使用。
3. 处于高速分裂和增殖状态中的细胞，有时也会出现细胞核中的DNA 断裂。建议：在非高增殖期取样检测；
4. 有些试剂或细胞存在自发荧光，选择染料时要避开自发荧光的颜色。
5. DAB 孵育时间过长，减少DAB 染色时间。
6. Biotin-X-dUTP 的非特异性结合，在TdT 酶反应之后，再用含0.1% Triton X-100 和1 mg/ml BSA 的PBS 洗三次。
◆标记率低？
1. 乙醇、甲醇或甲醛（市面上购买的甲醛大多含有甲醇）固定的样品标记效率较低（因为在固定时染色质未能与蛋白质交联，而在操作中丢失），采用推荐的固定液。
2. 固定时间过长，导致交联程度过高，减少固定时间。
3. 贴壁细胞如果使用药物诱导凋亡，会细胞皱缩，贴壁黏附力降低，导致凋亡细胞容易脱落。建议：在凋亡诱导结束后，可以对多孔板进行1000g离心5min，然后再吸出培养基并用PBS洗涤。如果没有适合的离心机，请注意操作轻缓，防止发生凋亡的细胞在洗涤时被洗去。后续整个操作也需要轻缓。
◆在蛋白酶K中消化组织样品多久？
大部分组织样品需要充分消化15分钟。最佳的培养时间根据组织类型和厚度而不同。脑组织比其他组织需要更长的蛋白酶处理时间。
◆实验的组织切片应该多厚？
老鼠肠、肾脏、肝脏、心脏和结肠厚度5–20 µm。
使用本产品的文献：
1.OGG1-initiated base excision repair exacerbates oxidative stress-induced parthanatos
Ruoxi Wang, Chunshuang Li, Ping Qiao, Yaoyao XUE, Xu Zheng, Hongyu Chen, Xianlu Zeng,Wenguang Liu, Istvan Boldogh, XUEqing Ba
Cell Death&Disease(2018) DOI： 10.1038/s41419-018-0680-0
应用方向：流式分析
2.VEGF-C/VEGFR-3 axis protects against pressure-overload induced cardiac dysfunction through regulation of lymphangiogenesis
Qiu-Yue Lin, Yun-Long Zhang, Jie Bai, Jin-Qiu Liu, Hui-Hua Li
Clin Transl Med
3.Naringin interferes doxorubicin-induced myocardial injury by promoting the expression of ECHS1
Zirui Zhao，Shilei Yang，Yawen Deng，Liang Wang，Yifen Zhang，Zhenyu Feng，Han Li，Zhongchao Chi，Yunpeng Xie and Deshi Dong
Frontiers in Pharmacology
参考文献
1.Apoptosis caused by Hsp90 inhibitor geldanamycin in Leishmania donovani during promastigote-to-amastigote transformation stage
应用方向：细胞凋亡染色&流式分析
2.Notch gain of function in mouse periocular mesenchyme downregulates FoxL2 and impairs eyelid levator muscle formation, leading to congenital blepharophimosis
应用方向：切片染色