上海金畔生物科技有限公司代理UELANDY荧光染料全系系列产品

UE质粒中量制备试剂盒

产品货号: UE-MD-P-10/UE-MD-P-25

产品规格: 10T/25T

目录价（元）:674.7/1261.7

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产品概述：
储存条件
RNase A: 50 mg /ml,室温贮存6个月；长期贮存于-20℃。
Buffer S1: 细菌悬浮液。加入RNase A后，混合均匀，4℃贮存。
Buffer S2: 细菌裂解液（含SDS/NaOH)。室温密闭贮存。
Buffer S3K : 中和液，室温密闭贮存。
Buffer B: DNA结合溶液，室温密闭贮存。
Buffer W1: 洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate: 去盐液。使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（可用100%乙醇或95%乙醇），混合均匀，室温密闭贮存。
Eluent : 洗脱液 室温密闭贮存。

流程图

说明书：

 UE-UE-MD-P-10/UE-MD-P-25    
常见问题解答：

◆同样体积的新鲜菌液，为什么有些提取的质粒浓度高，而有些质粒的浓度低？这些情况应该如何处理？
质粒提取高低的一个重要决定性因素是质粒载体的拷贝数，即质粒在一个大肠杆菌中的数目。对于低拷贝数的质粒，需要适当增加菌液的收集量，详情请参阅说明书。
以下是几种常见载体的拷贝数：

◆使用UE质粒中量制备试剂盒时，在DNA结合/洗涤步骤中能否使用离心法？
不建议使用。UE质粒中量制备试剂盒中的质粒制备管不能与常规的15ml，50ml离心管配套，所以无法使用。您可以通过使用负压装置来解决这一问题。如果无法取得相配套的负压装置，可以尝试手推过滤器的方式进行，但这样的操作容易引起污染。

◆我提取的质粒为什么会有基因组条带？
菌体在裂解和中和过程中如果操作过于剧烈就容易引起基因组污染。加入Buffer S2后要轻柔混匀，加入Buffer S3后混合均匀。如果发现裂解物在操作过程中过于黏稠，需要适当降低菌体的用量。

◆我提取的质粒在电泳图片上看，有一条紧挨着主带的小条带请问这是什么原因？如何判定它是否是杂带？
那条带很有可能就是变性条带。如果在加入Buffer S2后没有及时混匀菌体，会导致菌体局部碱性过强，破坏质粒的结构，在加入Buffer S3后质粒无法完全复性，就产生了这样的变性条带。
检测的方式是通过酶切检测，如果这条带在酶切后依然存在，则是变性条带，如果酶切后消失，则可能是质粒的不同状态。

◆我提取的质粒有明显的RNA污染，请问是什么原因？
可能有以下两种可能：
1、RNase A活力下降。Buffer S1在加入RNase A后要保存在4℃冰箱。如果室温放置，RNase A活力会下降，导致RNA污染。
2、菌体过量。如果使用的菌体量过多，也可能导致RNA污染。适当减少菌体的用量。

◆质粒得率很低，请问是什么原因？
质粒低的可能因素很多，以下是几种可能原因：
1、菌体过量，导致菌体不能完全裂解和中和，最终导致质粒得率低。
2、Buffer W2中未按瓶子上得标注体积加入乙醇。
3、菌体老化，影响提取的效果。建议对菌液进行划板培养，筛选新鲜克隆。

◆请问Eluent Buffer的配方是什么？对于DNA测序有没有影响？
Eluent Buffer 的配方是2.5mM Tris-HCl,pH8.0。质粒在这样的溶液中能够稳定保存，而且测序不受影响。