UDP糖|用高效液相色谱法测定长花百合花粉中部分纯化糖激酶(glucuronkinase)的非放射性酶

重组的udp -糖焦磷酸化酶,该酶具有广泛底物特异性,来自豌豆(Pisum satium, PsUSP)或拟南芥(Arabidopsis thalihaia, AtUSP)作为偶联酶。葡萄糖醛酸激酶经deae -琼脂糖柱部分纯化。


通过非放射性偶联酶试验测定激酶活性,在该反应中产生的葡萄糖醛酸-1-磷酸被udp -糖焦磷酸化酶使用,并进一步转化为udp -葡萄糖醛酸。


该udp -糖,以及不同的副产物,用高效液相色谱法检测,采用强阴离子交换柱或反相C18柱,波长为260 nm。由于USP具有广泛的底物特异性,该方法适用于不同的激酶和糖。


高效液相色谱法是高度敏感的,允许在pmol min-1范围内测量激酶活性。


此外,它可以用于纯激酶以及粗或部分纯化的酶溶液的测定,而没有任何atp酶或NADH氧化酶的干扰背景,这在不同的光度测定中会引起麻烦。

UDP糖|用高效液相色谱法测定长花百合花粉中部分纯化糖激酶(glucuronkinase)的非放射性酶

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