通过用牛血清白蛋白BSA与人凝血因子VIII偶联后的偶联物作为抗原免疫Balb/c小鼠，取其脾脏细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合，用HAT培养基进行选择性培养，利用有限稀释法通过多次克隆化，经过筛选获得稳定分泌抗人凝血因子VIII单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

制备步骤：

1)制备免疫抗原：通过同型双功能蛋白交联剂将人凝血因子VIII与 牛血清白蛋白偶联，得到人凝血因子VIII-牛血清白蛋白偶联物；

2)免疫小鼠：采用小剂量长周期免疫方案，利用步骤1)中得到的人 凝血因子VIII-牛血清白蛋白偶联物作用免疫抗原，对Balb/c小鼠进行免 疫；

3)细胞融合：将SP2/0小鼠骨髓瘤细胞与步骤2)获得的免疫Balb/c 小鼠的脾脏细胞融合，在含有HAT的RPMI-1640培养基中进行选择性培 养；

4)杂交瘤细胞的选择性培养：在步骤3)中融合后的细胞在HAT培养基 中选择性培养后，选择小鼠脾脏细胞与小鼠杂交瘤细胞SP2/0的融合细胞；

5)单克隆化：将步骤4)中获得的经检测为阳性的杂交瘤细胞经有限稀释法进行多次单克隆获得稳定分泌抗人凝血因子VIII单克隆抗体的杂 交瘤细胞株。