细胞传代的培养技巧

　　细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。那么你知道细胞传代的培养技巧有什么吗？让我们一起来看看吧！

　　一、选择适合的细胞培养基：

　　合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的重要条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。

　　二、根据细胞生长方式不同又分为贴壁细胞和悬浮细胞：

　　贴壁细胞：必须贴附于支持物表面才能生长，见于各种实体瘤细胞；

　　悬浮细胞：于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面，见于各种造血系统肿瘤细胞。

　　正常细胞形态较好，轮廓清晰，边缘透亮，细胞增殖状况良好。当贴壁细胞长到密度90%时，需进行传代。

　　贴壁细胞传代：

　　丢掉原有的培养基加入复温的PBS润洗两次，吸掉PBS，加入胰酶消化细胞，显微镜下观察，待细胞变圆，细胞间隙明显，部分细胞刚开始漂浮的时候加入培养基，然后将细胞小心吹打下来，1000rpm/min室温离心5min，弃上清，细胞沉淀用培养基重悬，按合适的密度分到几个培养瓶中进行下一轮培养。

　　对于较难消化的细胞，可以用2%利多卡yin消化5-8分钟，然后再弃去，加培养基吹打也可以，对细胞的影响不大。

　　悬浮细胞传代：

　　悬浮细胞传代比贴壁细胞传代操作步骤较简单。因为细胞已经悬浮在生长培养基中，所以无需进行酶处理即可将其从培养容器中取出，整个过程更快，对细胞的损伤更小。悬浮细胞多采用离心法传代，细胞离心后去掉上层清液，沉淀细胞加新培养液后吹打混匀传代。也可以直接稀释培养瓶中的细胞并使其继续扩增，或通过从培养瓶中取出一部分细胞并将剩余细胞稀释至适合细胞系的接种密度。

　　一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，将细胞悬液移入离心管中，1000 rpm/min室温离心5 min。弃上清，细胞沉淀用w全培养液重悬，按要求分瓶(视细胞密度而定1:4-1:8)，每T25瓶加w全培养液至4-5 ml，37℃、5%CO2孵箱培养。有些悬浮细胞趋于成团生长，此时细胞生长状态良好，当补液时，需避免反复吹打。

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