Elabscience一步法TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒的常见问题及解决方法有什么

Elabscience® One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit 是一款灵敏度高且能快速简便的检测细胞凋亡的产品。本试剂盒适用于组织样本(石蜡切片、冰冻切片)和细胞样本(细胞涂片、细胞爬片)的原位凋亡检测，检测结果可通过荧光显微镜直接观察。那么你知道Elabscience一步法TUNEL原位细胞凋亡检测试剂盒的常见问题有什么吗？该如何解决呢？让我们一起来看看吧！

一、非特异性染色

原因：

1. TdT酶的浓度过高。

2. TdT酶反应时间过长或TdT酶反应过程中反应液渗漏，细胞或组织表面不能保持湿润。

3. 光照紫外线导致包埋试剂的聚合（如：甲基丙烯酸会导致样本DNA的断裂）。

4. 在固定组织时样本 DNA 已断裂（内源核酸酶的作用）。

5. 使用了不适当的固定液，例如一些酸性固定液。

6. 固定后某些核酸酶活性依然较高导致 DNA 断裂。

解决方法：

1. 用TdT Equilibration Buffer以1:2~1:10稀释。

2. 注意控制反应时间，并 确保TdT酶反应液能很好地覆盖样品。

3. 尝试改用其它包埋材料或其它聚合试剂。

4. 确保样品取样后立即固定或通过肝静脉灌注固定。

5. 采用推荐的固定液。

6. 用含有dUTP和dAPT的溶液封闭。

二、标记率低

原因：

1. 如果以乙醇或甲醇固定的样本则标记效率较低（因为在固定时染色质未能与蛋白质交联，而在操作中丢失）。

2. 固定时间过长，导致交联程度过高。

3. 石蜡切片脱蜡不充分。

4. 荧光淬灭。

5. 通透条件不佳，以致于试剂不能到达靶分子或浓度过低。

解决方法：

1. 用溶于 PBS pH7.4中的4%多聚甲醛固定或福尔马林或戊二醛固定。

2. 减少固定时间，或用溶于PBS pH7.4的2%多聚甲醛固定。

3. 延长脱蜡时间；更换新的脱蜡液。

4. 注意避光操作。

5. 增加通透时间；优化蛋白酶K的作用浓度和作用时间。

三、组织样本脱落

原因：

组织样本被酶从载玻片上消化下来。

解决方法：

降低蛋白酶K的处理时间。

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