ELISA检测方法有哪些?
根据试剂的来源和标本的性状及检测的具备条件的不同,所使用的检测方法也不同,那么ELISA检测方法有哪些呢?让我们一起来看看吧!
一、双抗体夹心法测抗原
双抗体夹心法是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体,然后和待测血清中的响应抗原结合形成免疫复合物,洗涤后加酶标记抗体,与免疫复合物中的抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物,加底物显色,判断抗原的含量。
二、竞争法
首先将特异性抗体包被于固相载体表面,经洗涤后分成两组:一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液,另一组只加酶标记抗原,经孵育洗涤后加底物显色,这两组底物降解量之差,即为所要测定的未知抗原的量。此方法测定的抗原只要有一个结合部位即可,对小分子抗原如激素和药物类的测定常用此法。
三、直接法
在直接Elisa中,抗原通过被动吸附直接固定在板的表面,并使用HRP标记的一抗进行检测。将无色底物引入样品,该底物与酶结合物反应,并产生可测量的副产物。根据底物的选择,该副产物可以是比色的,化学发光的或荧光的。信号产生的大小与样品中抗原的数量成正比。
四、间接法
间接Elisa本质上是直接ELISA的修改版本。在间接ELISA中,用于检测抗原的一抗是未偶联的。取而代之的是,对一抗的宿主物种具有反应性的酶标二级抗体被用于检测一抗-抗原复合物(间接检测抗原)。将无色底物引入样品,该底物与酶结合物反应,并产生可测量的副产物。根据底物的选择,该副产物可以是比色的,化学发光的或荧光的。信号产生的大小与样品中抗原的数量成正比。与直接ELISA相比,使用辅助检测试剂具有明显的优势,即信号放大。
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