Lipo3000细胞转染的实验步骤及注意事项

细胞转染常用的转染试剂很多，其中，Lipo3000深受广大科研工作者的喜爱，那我们来看看Lipo3000细胞转染的实验步骤及注意事项吧！

一、实验前准备

Lipofectamine™ 3000 转染试剂（Thermo Fisher）、Opti-MEM（可以用无血清的培养基代替）

二、实验步骤

1.接种细胞，使其在转染时达到70–90% 汇合度。

注：对于HEK293，6孔板一般铺50万个细胞左右。对于PC9, 24孔板一般铺5-10万个细胞。由于不同细胞，生长状况不太一样，需要根据情况调整。

2. 使用Opti-MEM™培养基稀释Lipofectamine™ 3000 试 剂，充分混匀。

3.使用Opti-MEM™培养基稀释DNA，制备 DNA 预混液，然后添加P3000™ 试剂，充分混匀。

4.将上面两步溶液合在一起，混匀并孵育10-15mins。

5.将混匀后的溶液加入到细胞培养基中，并轻轻摇晃培养基，使其均匀。

6.37°C 孵育细胞 2–4 天，然后分析转染细胞。

转染量：

三、注意事项

1.Opti-MEM需要37℃水浴锅预热。

2.转染 siRNA 至细胞时，在稀释 siRNA 时不要加入 P3000™ 试剂。

3.关于Lipo3000的用量，比如6孔板推荐用量有两个3.75ul和7.5ul，最di看转染xiao率，最高看细胞耐受。

4. Opti-MEM与Lipo3000预混及Opti-MEM、质粒及P3000预混，都不需要各自孵育，而且两者混合后孵育时间最多不要超过15mins。

5.转染中和转染后的细胞培养基中最好不要含有双抗。

对于比较好转染的细胞，如HEK293，而且需要大量转染的时候，可以使用PEI进行转染，毕竟Lipo3000比较贵。例如，在做CO-IP实验时，需要10cm皿转染好几种质粒，就可以用PEI进行细胞转染。CO-IP步骤见免疫共沉淀Co-IP实验步骤。

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