Serochem PEI转染试剂在CHO悬浮细胞上的转染步骤

Serochem PEI转染试剂在CHO悬浮细胞上的转染步骤如下：

一、转染前

传代和扩增细胞以获得具有大于95%的活力和介于（1.5至2.0）x 10⁶之间的活细胞密度的培养物.

二、转染

1.在转染前，确保生存能力大于95%，活细胞密度为（1.5至2.0）x 10 6细胞/mL。

2.将活细胞密度稀释至1.05 x 10 6每毫升细胞数。

3.转化pDNA和PEI引物™ 1 mg/mL试剂容器多次以充分混合。

4.将每mL培养物转移1μg pDNA至一个干净的小瓶中转染。用新鲜培养基（5%最终培养体积）稀释至20μg/mL。

5.将5μL PEI Prime转移到一个干净的小瓶中™ 每毫升1毫克/毫待转染的培养物。使用培养基稀释至75μg/mL（5%最终培养物

体积）。

6.将稀释的pDNA和PEI Prime™混合在一起. 反转几次，然后允许在室温下加盖休息10分钟。轻轻翻转，使用前立即关闭容器

一次。

7.使用10mL pDNA/PEI混合物用于每90mL待培养的培养物转染。一边搅拌一边逐渐将混合物加入培养基中。

8.按照典型条件培养细胞。

三、转染后

如果使用饲料、加强剂、补充剂或增强剂，在转染后6小时可以添加。

根据细胞培养基的不同，可能需要添加钠丁酸盐添加到培养基中以获得CHO悬浮液中的基因表达。如有必要，确定，制备5个

转染后的亚培养物，并添加丁酸钠至0、2.5、5、7.5或10mM的最终浓度基于最终产率的适当浓度。如果使用GFP对照，转染效率应超过70%。48小时后观察。对于优化的程序，超过80%的效率是合理的。监测表达水平并在观

察到稳定滴度后收获。对于典型的过程，在转染后5至7天分泌的蛋白质将最高。其他工艺，如使用低温和/或使用批进料以获得

最大产量，将改变峰值收获窗口。

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