天根全血dna提取试剂盒说明书
天根全血dna提取试剂盒简介：
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和dute的缓冲液系统，提取血液中的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料，高效、专一吸附DNA,可有效去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。
使用本试剂盒纯化的DNA适用于酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等各种常规实验，和芯片杂交、高通量测序等高质量DNA需求的实验。
天根全血dna提取试剂盒特点：
1.样本适用广泛：可从抗凝血(EDTA,肝素等)、白膜层和血凝块等样品中直接提取基因组DNA。
2.高质量：dute的裂解缓冲体系，纯化的DNA具有高浓度，高纯度，完整性好等特点，满足芯片杂交，高通量测序等实验需求。
3.快速低毒：采用硅胶膜吸附原理，无需酚氯仿，1h内即可完成实验。
天根全血dna提取试剂盒操作步骤：
1.处理血液样品(本产品适用于处理100μl-1ml血液样品):
a.提取200μl血液样品时，可直接进行下一步实验。
b.提取小于200μl血液样品时，可加缓冲液GS补足体积至200μl,再进行下一步实验。注意：步骤a和b适用于大多数100-200μl血液样品的提取，但有些血液样品由于蛋白，糖类，脂类含量较多或样本储存条件不佳会导致OD260/0D230比值偏低，如需提高OD260/0D230比值可在样品中加入1-2.5倍血液样品体积的细胞裂解液CL进行处理，具体步骤同c。
c.提取大于200μ血液样品时，需细胞裂解液CL处理，具体步骤如下：在样品中加入
1-2.5倍血液样品体积的细胞裂解液CL,颠倒混匀，10,000 rpm(~11,500×g )离心1
min,吸去上清，留下细胞核沉淀(如果裂解不chedi，可加入1-2.5倍血液样品体积的细胞裂解液CL重复裂解一次),向细胞核沉淀中加200μl缓冲液GS,振荡至chedi混匀，再进行下一步实验。
d.当处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，红细胞有核细胞，因此处理量为5-20μl,加缓冲液GS补足200μl,再进行下一步实验。
e.当处理血样为血凝块，可选择液化柱CX1(TIANGEN,RK165)(需自备)对血凝块进行液化处理，具体步骤如下：
e1.取血凝块至液化柱CX1中，12,000 rpm(~11,500×g)离心1 min,收集滤液(若血凝块量大可分批多次过柱离心，收集滤液)。
e2.取100μl-1 ml滤液加入1-2.5倍血液样品体积的细胞裂解液CL,颠倒混匀，10,000rpm(~11,500×g)离心1min,吸去上清，留下细胞核沉淀(如果裂解不chedi，可加入1-2.5倍血液样品体积的细胞裂解液CL重复裂解一次),向收集到的细胞核沉淀中加200μl缓冲液GS,振荡至chedi混匀，再进行下一步实验。
注意：如果需要去除RNA,可加入4 μl RNase A(100 mg/ml)溶液(TIANGEN,RT405-12)(需自备)至上述处理获得的200μl样品中，振荡15 sec,室温放置5min。
2.加入200μl缓冲液GB和20μl Proteinase K的预混溶液至上述处理获得的200μl样品中，充分颠倒混匀，56℃放置10 min,其间颠倒混匀数次，溶液应变清亮(如溶液未chedi变清亮，请延长裂解时间至溶液清亮为止)。
注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般37℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不chedi，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。当血液体积≥200μl且没有采用红细胞裂解处理，或是样本储存条件不佳，水浴后颜色可能为深褐色，注意溶液中没有团块等沉淀。
注意：如果血液样品经过细胞裂解液CL处理，大多数情况下加入缓冲液GB充分颠倒混匀后，室温放置5 min(其间颠倒混匀1-2次)即可得到高质量基因组DNA。
3.室温放置2-5 min后加入350μl缓冲液BD,充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀。
4.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CG2中(吸附柱CG2放入收集管中),12,000 rpm(~13,400×g)离心30 sec,倒掉收集管中的废液，将吸附柱CG2放入收集管中。
5.向吸附柱CG2中加入500μl缓冲液GDB,12,000 rpm(~13,400×g )离心30 sec,倒掉收集管中的废液，将吸附柱CG2放入收集管中。
6.向吸附柱CG2中加入600 μl漂洗液PWB(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g)离心30 sec,倒掉收集管中的废液，将吸附柱CG2放入收集管中。
7.重复操作步骤6。
注意：如果血样经过细胞裂解液CL处理，可省略步骤7。
8. 12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min,倒掉废液。将吸附柱CG2置于室温放置2 min,以chedi晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
9.将吸附柱CG2转入1.5 ml离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加50-200 μl洗脱缓冲液TB,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心2min,将溶液收集到离心管中。注意：洗脱缓冲液体积不应少于50l,体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CG2中，室温放置2 min,12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min。洗脱液的pH对于洗脱效率有很大影响。若用ddH₂O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。
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