NEB限制性内切酶介绍

NEB向研究界提供限制性内切酶超过45年， 多年来，NEB不断努力开发出纯度最高、性能无yu伦bi的酶。

NEB限制性内切酶分为五大类别，分别是：高保真限制性内切酶、Homing 核酸内切酶、Nicking核酸内切酶、表观遗传学分析中的限制性内切酶、省时有效的限制性内切酶。

1、高保真限制性内切酶简介

高保真限制性内切酶是通过交换功能性氨基酸残基，然后筛选在广泛条件下发挥作用的最佳突变体而设计的。无论你是将消化物放置5-15分钟还是过夜，或者使用不同量的酶，高保真限制性内切酶都能确保你所需的性能。

2、Homing 核酸内切酶

Homing 核酸内切酶是双链DNA酶，具有大的不对称识别位点（12-40个碱基对）和通常嵌入内含子或内含子的编码序列。内含子是由前体RNA剪接而成，而内含子则由前体蛋白质剪接而成。归位核酸内切酶是使用类似于限制性核酸内切酶的惯例命名的，其内含子编码的核酸内切酶包含前缀“I-“，而内含子编码核酸内切酶则包含前缀“PI-“。

Homing 核酸内切酶识别位点极其罕见。例如，在随机序列的每7 x 10¹⁰个碱基对中，18个碱基对的识别序列将仅出现一次。这相当于20个哺乳动物大小的基因组中只有一个位点。然而，与限制性内切酶不同，归巢性内切酶在其识别序列内容忍一些序列退化。也就是说，单碱基的改变并没有消除裂解，而是在不同程度上降低了裂解的效率。结果，它们观察到的序列特异性通常在10-12个碱基对的范围内。

3、Nicking核酸内切酶

Nicking核酸内切酶与限制性核酸内切酶一样使用简单。由于6或7碱基缺口内切酶产生的缺口不会使DNA片段化，因此通过将超螺旋质粒转化为开环来监测它们的活性。或者，可以使用在相反的线束上具有足够近的缺口位置以形成双绞线切割的基板。

4、表观遗传学分析中的限制性内切酶

许多限制性内切酶对DNA甲基化状态敏感。当识别位点中的特定碱基被修饰时，裂解可能被阻断或受损。NEB的科学家最近鉴定了MspJI（NEB#R0661）限制性内切酶家族，该家族依赖于甲基化和羟甲基化才能发生切割。这些酶切除了约32个碱基对片段，这些片段包含一个位于中心的5-mC或5-mC修饰的残基，可以提取并测序。由于这种表观遗传学修饰的已知位置，在下游分析之前不需要亚硫酸氢盐转化。这些表观遗传学标记验证的甲基化依赖性限制性内切酶扩大了绘制表观遗传学修饰的潜力，并简化了DNA甲基化的研究。此外，它们为更好地了解5-羟甲基胞嘧啶在基因组中的作用提供了机会。

我们现有的几种限制性内切酶也可用于研究DNA的表观遗传学修饰，如识别相同序列但不同甲基化模式的DpnI（NEB#R0176）和DpnII（NEB#R0543）。McrBC也只在一条或两条链上切割甲基化胞嘧啶的DNA。MspI（NEB#R0106）和Hpall（NEB#R0171）识别相同的序列（CCGG），但对不同的甲基化状态敏感。Hpall只切割一个wanquan未修饰的位点：胞嘧啶上的任何修饰（5-mC、5-mCo或5-ghmC）都会阻断切割。MspI会识别并切割5-hmC和5-hmC，但不会识别和切割5-ghmc。这些酶包含在EpiMark®5-mC和5-mC分析试剂盒（NEB#E3317）中。

5、省时有效的限制性内切酶

在NEB，酶的生产与限制性修饰系统的克隆和过表达的基础研究有关。这一重点使我们能够提供浓度极gao的酶，为您的实验设计提供更大的灵活性。

无论您是快速筛选大量克隆还是设置过夜消化，您都将受益于我们的高质量酶。通常，限制性消化包括将1µl酶与1µg纯化DNA在50µl的最终体积中孵育1小时。然而，为了加快筛选过程，请选择一种符合时间节约标准的NEB酶。在推荐的反应条件下，使用1µl的酶，这些酶将在5-15分钟内消化1µg的底物DNA，也可以安全地用于过夜消化。与其他供应商不同，没有特殊的配方、浓度变化或需要购买更昂贵的新酶系才能在5-15分钟内完成消化，也不必担心孵化时间过长。

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