BioToolomics之CNBr活化琼脂糖色谱填料产品特性

BioToolomics之CNBr活化琼脂糖色谱填料产品特性

 BioToolomicsCNBr活化琼脂糖色谱填料产品特性

CNBr活化琼脂糖在制备和使用定制亲和色谱填料方面具有良好的记录。将生物特异性配体与CNBr活化的琼脂糖偶联是一项广泛使用、成功且有据可查的技术。偶联反应是自发的、快速的并且易于进行。不需要有毒化学品或特殊制备。

这种预活化的琼脂糖基质可以很容易地用于制造各种亲和色谱填料,适用于小规模和大规模纯化应用。应用领域包括蛋白质、多肽和核酸的固定化。

  

1. 属性

CNBr活化琼脂糖色谱填料(CNBr-activated SepFast 4 HF)由高度交联的4%珠状琼脂糖制成。它具有高机械刚度,可在降低背压的情况下实现高流量。

由于琼脂糖具有出色的亲水性和低非特异性结合特性,长期以来一直用于色谱分离。这些颗粒具有开孔结构,对大蛋白质分子具有出色的传质性能。

基础基质与溴化氢(CNBr)反应生成活性基团,这些活性基团与待固定分子中的伯胺基团反应。CNBr活化琼脂糖色谱填料(CNBr-activated SepFast)添加添加剂的冻干粉形式提供。

1  CNBr活化琼脂糖色谱填料(CNBr-activated SepFast 4 HF)的特性

可耦联基团

-NH2

基质

高度交联的4%琼脂糖(4HF

粒径

50-150 μm

膨胀系数

3-5 ml/g粉末

活化水平

5 mg BSA/ml medium

pH稳定性

3-11(具有配体依赖性)

化学稳定性

偶联配体能够接受的所有常用的水性化学品稳定

保存

4-8

2. 配体固定化

以下是配体一般的偶联流程

2.1    将目标配体溶解在含有0.5 M  NaCl0.1 M  NaHCO3pH  8.3的偶联缓冲液中。对于蛋白质配体,凝胶浓度为5 20  mg/ml。对于小配体,制作1 – 10µmol/ml凝胶。偶联缓冲液的体积应与固定凝胶的体积相同。

2.2  称取所需的粉末(1 g干粉提供约9 ‑ 12 ml的沉降填料)并将其悬浮在冷的 1 mM  HCl中(1 干粉使用20  ml冷的1 mM  HCl)。让填料在低温下膨胀2    3分钟。

2.3   快速去除过滤装置中的液体。

2.4  将洗净吸干的凝胶转移到偶联缓冲液中。

2.5  浆液在4℃下混合过夜或在室温下混合3-4小时

2.6  用至少倍凝胶体积的偶联缓冲液清洗凝胶。

2.7 将凝胶重新悬浮到相同体积的封闭溶液中,0.1 M Tris/HClpH  8.0 1  M  乙醇胺 pH  8.0,持续2 – 3小时。

2.8 5倍体积的0.1 M 0.1 M Tris/HCl + 1 M NaClpH 8.0洗涤凝胶,然后用5倍体积的0.1 M醋酸盐缓冲液 + 1 M NaClpH 4.0洗涤凝胶。

2.9 使用前用工作/平衡缓冲液清洗凝胶。

3. 固定化效率的一般考虑

3.1 pH

pH 8.3的缓冲液常用于蛋白质固定然而偶联pH6-10之间进行优化以获得最佳结果(例如,高偶联产率和高配体活性)。

注意:配体溶解后要调节偶联pH值。

3.2 偶联方案

应避免使用含有氨基的溶液。

可以引入稀释的某些有机溶剂以提高配体的溶解度。应事先测试此类溶剂的适用性。

3.3

偶联缓冲液中盐的存在可以提高固定效率。

3.4 基础基质中的活化基团

对于某些配体或应用,基础基质中的活化水平可能过,偶联配体的活性可能会降低。

在降低的pH值下偶联可能会减少配体分子的连接点。它可以提偶联配体的活性。活化基团的受控水解,例如在添加配体前几个小时用偶联缓冲液孵育凝胶,也可以减少过度偶联问题。

3.5 屏蔽剩余的活化配体

未与配体反应的活化基团应通过添加额外的含有pH 8 – 9伯胺的小分子(例如Tris或乙醇胺)来封端。

3.6 最终填料的洗涤

偶联反应后需要将未连接或弱连接的配体完q洗掉。采用高pH值和低pH值交替的洗涤方法可以确保有效去除不需要的物质。

4. 固定化亲和填料的使用

配体偶联填料可用于使用间歇搅拌罐模式或填充柱模式的纯化。处理这种材料遵循与处理其他基于琼脂糖基质相同的原则。

5. 储存

冻干的CNBr活化琼脂糖色谱填料(CNBr-activated SepFast 4 HF)应在8℃下储存。偶联的湿填料应在防菌剂(例如20%乙醇)存在的情况下于4-8℃储存。切勿冻存耦合填料。

6. 更多信息

访问www.bestbaiao.com了解更多关于BioToolomics产品代理信息或联系上海金畔生物科技有限公司了解产品信息。

7. 订购信息

产品

规格

货号

CNBr-activated

SepFast 4HF

1 g

310101-1G

5 g

310101-5G

500 g

310101-500G