说到RNA提取试剂盒你对它真的了解了吗?
RNA提取试剂盒用于从细胞、组织、新鲜血液和病毒中提取200bp及以下的smallRNA,用LB10裂解样品后,加入氯仿,溶液分为无色水相和粉红色有机相,RNA在水相中;用RNA硅胶膜离心柱特异地吸附水相中的大分子量RNA(28SrRNA,18SrRNA,mRNA),流出液中的smallRNA用miRNA硅胶膜离心柱特异地吸附。与其它miRNA提取方法相比,该试剂盒裂解能力强、提取量高、专一性强,应用范围广。
RNA提取试剂盒其主要特征在于分离装置中采用纤维素为固相载体,利用融合蛋白CBD-SA作为生物桥联剂,以生物特异性偶联法代替传统的物理吸附法和化学键合法活化纤维素固相载体,活化后的固相载体能够高效率的结合生物素化的试剂,可用于蛋白或核酸的分离。构建cDNA文库、蛋白质的体外翻译和RT-PCR方法检测稀有的mRNA等研究常常需要从总RNA中分离mRNA,mRNA只占总RNA的1%左右,但由于带poly(A)尾巴,所以可以通过与Oligo(dT)的亲和结合而与其RNA(如rRNA、tRNA等)分离开。
RNA提取试剂盒使用方法:将0.5mL结合液加入到一管装有1mgOligo(dT)纤维素的离心管中,放置5分钟后离心吸弃上清后待用。将制备的总RNA100μL加热到65℃5分钟后加入等体积的结合液,转移到装有Oligo(dT)纤维素的离心管中,颠倒混匀数次,离心后将上清转移到一个离心管中。用0.5mL结合液,混匀后4℃200g离心5分钟,小心弃上清。重复上步洗3-5次,用RNase-free水洗脱mRNA,用微量核酸沉淀剂沉淀回收mRNA。