细胞端粒酶活性分析

细胞端粒酶活性分析
端粒酶活性分析简介
       端粒是真核细胞染色体末端的一段特殊序列，由上千个6碱基重复序列(TTAGGG)组成。在体细胞中，随着细胞的分裂，端粒长度会变短。端粒酶是基本的核蛋白逆转录酶，在细胞染色体复制过程中，能够以自身RNA为模板，在染色体3’末端合成重复序列，维持端粒的长度。端粒酶的活性端粒酶在正常人体组织中的活性被抑制，但是在一些“不死细胞”如肿瘤细胞、生殖细胞中则具有很高的活性，补偿DNA复制导致的端粒缩短从而维持端粒长度的稳定。因此可以假设端粒长度可能起到“有丝分裂钟”的作用，来可作为测量细胞分裂的次数的标志，终作为细胞衰老和凋亡的信号。因此，检测细胞中端粒酶的活性对干细胞、肿瘤生物学的研究具有很重要的意义，已有研究表明，在20多种肿瘤细胞中，80%以上可以检测到粒酶活性。
      利用端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列的原理，1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法（telomeric repeat amplification protocol, TRAP）。TRAP主要原理如下：先合成一个18nt的TS做上游引物，端粒酶结合TS末端的GTT并合成AGGGTTAG，然后每经过一次转位合成一个ggttag的6碱基重复序列，端粒酶灭活后，加入一个24nt的CX做下游引物，经过多次变性-退火-延伸，扩增端粒酶延伸产物。然后对PCR产物使用不同的方法进行检测，从而达到检测端粒酶活性的目的，目前主要的方法有同位素法、染色法、荧光法、ELISA法。目前大部分的端粒酶检测试剂盒均是按照这个原理发展起来的。
 
 
检测结果示例
通过TRAP-PCR染色法检测鉴定样品中端粒酶活性

检测原理
       端粒DNA与细胞的寿命密切相关，而合成又依赖于端粒酶。正常人体细胞中不能检测出端粒酶活性的表达，而肿瘤细胞株及大多数肿瘤组织中的端粒酶活性却异常的高表达。TRAP－银染法端粒酶活性检测试剂盒是采用端粒重复序列扩增的方法，利用银染技术检测端粒酶的活性。阳性结果在凝胶电泳上显示相隔6 bp的梯状条带，条带的深浅表示端粒酶活性的大小。

实验室检测流程
1．细胞端粒酶或组织标本端粒酶的提取。
2．PCR扩增。
3．聚丙烯酰胺凝胶电泳。
4．银染。

客户提供
1、样品信息：包括来源、种属等。
2、实验样本材料：新鲜细胞样本不少于5×105 个，新鲜血浆样本不少于500ul。
 
服务周期
2-3周（具体视样品数而定）

项目交付
1、提交实验报告书，包括实验材料、试剂、仪器、实验过程方法、结果及分析。
2、原始数据、图片，以及文本电子版。
 
服务流程
1、提交项目课题相关需求和资料。
2、与我们的专业技术团队讨论项目细节。
3、根据讨论后的意见对实验方案进行修改。
4、双方均满意并达成一致，签订技术服务合同。
5、开展实验，按期完成合同规定的内容。
6、结题，提供实验原始结果和分析结果、实验流程、实验条件等等。
 
我们的优势
1、提供各种实验材料和仪器，满足项目课题实验需要。
2、专业的操作人员。
3、高规格实验室。
4、数据结果交付周期快。
5、完善的服务体系，全程跟进，确保满意。
 
咨询与订购
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