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卵巢癌3D类器官培养基

产品名称：卵巢癌3D类器官培养基（Ovarian Carcinoma Organoid Medium）
产品说明：卵巢癌3D类器官培养基（Ovarian Carcinoma Organoid Medium）是一种为促进人源卵巢癌类器官体外形成和扩增而开发的培养基。它是一种无菌的液体混合系统，含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质等。该培养基的*配方可以提供一个理想人源卵巢癌类器官体外培养环境，选择性地促进体外人源卵巢癌类器官的生长。

产品优势：
(1) 培养成功率高

(2) 体外持续扩增

(3) 保持肿瘤特征

(4) 药敏结果与临床数据接近

使用说明：
◉实验前准备
（1）15mL无菌离心管、1.5mL离心管、24孔细胞培养板、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入生物安全柜中紫外照射30min。
（2）提前30min从4℃冰箱取出卵巢癌类器官培养基平衡至室温，提前1h从-20℃冰箱取出所需体积的基质胶冰上融化。
◉卵巢癌类器官培养
（1）将获取的卵巢癌原代细胞悬液计数，根据计算好的体积吸取细胞悬液加入预冷的1.5mL离心管中。
（2）补齐预冷的卵巢癌类器官培养基至所需体积，将预冷后的细胞悬液加入等体积的基质胶中轻轻混匀（全程冰上操作），使得卵巢癌原代细胞终浓度为5×106个细胞/毫升。
（3）然后将细胞与基质胶的混合液按照50μL/孔呈半球形点胶于24孔板。
（4）将培养板放入5%CO2、37℃培养箱终至少30min，待基质胶*凝固。沿孔壁每孔缓慢加入500μL预先恢复至室温的类器官培养基，置5%CO2、37℃培养箱培养。
（5）3天后镜下观察类器官形成情况，粒径大于30~50μm即认为类器官已经形成，每5天更换一次培养基进行培养，持续观察类器官大小，镜下观察大部分类器官大小均大于30~50μm目大小不再增大即可收集类器官进行后续实验。
◉卵巢癌类器官收集
（1）弃培养基，每孔加入200μL基质胶解离试剂，室温放置1min。
（2）轻轻吹打混匀，收集至15mL离心管中，50rpm恒温震荡解离10-20min，解离之后1500rpm离心3 min，轻轻吸去上清，待用。
◉卵巢癌类器官传代
（1）收集的类器官，加入适量的消化酶，37℃，200rpm消化（具体时间根据类器官大小和数量决定，以肉眼可见颗粒明显减小一半为准，可中间取消化的类器官显微镜观察，类器官消化至3~10个细胞集合体理想）。
（2）消化*后1500rpm离心3min，弃上清，使用清洗液重悬后1500rpm离心3min。
（3）加入预冷的卵巢癌类器官培养基进行重悬，计数，按照培养步骤操作继续培养。
注意事项：
1.本产品在使用前需平衡至室温。
2.样本需为肿瘤组织，且肿瘤细胞比例越高（>50%），类器官培养成功率越高。3.使用产品时应注意无菌操作，避免污染。
4.类器官培养过程要轻柔，避免基质胶凝固后散胶。
5.为保持本产品的理想使用效果，不宜将其过夜放置于室温或较高的温度环境中。6.请于保质期内使用本产品，超出保质期，必须放弃使用。
7.本产品仅用于科研用途，不能用于体外诊断。