Au:CdTe量子点标记人肺癌细胞A549细胞的步骤方法

Au:CdTe量子点具有优良光学特征、较好的单分散性和结晶性，金掺杂量子点Au:CdTe具有较好的光稳定性、细胞亲和性，较小的细胞*性。利用Au:CdTe量子点荧光探针对肿瘤活细胞(A549)进行长期无损伤标记和荧光成像。表明Au:CdTe量子点是一种理想的生物探针，在生物标记和荧光成像方面具有潜在的应用价值。

量子点标记细胞步骤如下:

1) 在6孔板上使用DMEM培养基培养人肺癌细胞A549(37C,5%CO2,细胞培养箱内培养)。

2) 取生长至对数期的细胞培养板，移去培养基，用PBS(pH7.4)缓冲液冲洗2次。

3) 加入Au:CdTe量子点的PBS溶液(含量子点20nmol/mL)，置细胞培养箱内孵育20-40min。

4)用PBS冲洗2次，每孔加1mLPBS,盖好在6孔板上盖。放置到倒置荧光显微镜观测，并用CCD成像。

5)加入新鲜培养基继续培养。

6)定期移去培养基，换上PBS缓冲液，置荧光显微镜观察。

7)观察成像后，将PBS缓冲液换成新鲜培养基，平板放回培养箱继续培养，每天用观察荧光显微镜观察成像。为了更清晰显示量子点与细胞核的位置关系，取一部分量子点标记的A549细胞，用Hoechst33342对细胞核染色。Hoechst33342是—种可以穿透细胞膜的DNA结合染料，和双链DNA结合后，较大激发波长350nm,较大发射波长461nm(蓝色)。

图2.7Au:CdTe量子点(A-D)与CdTe(E-F)标记的A549活细胞荧光显微照片

左图:(A)Au:CdTe标记A549活细胞0.5h明场照片;(B)荧光照片示A549细胞内少量Au:CdTe信号(桔红);(C)Au:CdTe标记1h的明场照片;(D)荧光照片示细胞内大量Au:CdTe信号(桔红);

右图:(E)对照组CdTe标记0.5h明场照片:(F)荧光照片，看不到CdTe信号:(G)CdTe标记1h明场照片:(H)荧光照片示细胞内少量CdTe信号。

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