RNA提取的操作关键点在哪？

RNA是目前发现细胞内生物功能zui丰富多样的生物大分子，同时是DNA与蛋白质信息传递的桥梁，因此完整RNA的提取和纯化是功能基因组时代的重要手段。那么你知道RNA提取的关键点在哪吗？让我们一起来看看吧！

所有RNA的提取过程中都有五个关键：①样品细胞或组织的有效破碎；②有效地使核蛋白复合体变性解离，释放出RNA；③对RNA酶的有效抑制；④有效地将RNA从DNA和蛋白质混合物中分离；⑤对于多糖含量高的样品还要采取措施有效去除多糖杂质。但其中最关键的是抑制RNA酶的活性。

RNA酶(RNase)，尤其是胰RNA酶是一类生物活性非常稳定的酶类。除细胞内RNase以外，环境中灰尘、各种试验器皿和试剂、人体的汁液以及唾液中均存在RNase。这类酶耐热、耐酸、耐碱，如煮沸也不能使之wan全失活，蛋白质变性剂可使之暂时失活，但变性剂去除后，又可恢复活性。RNase 的活性不需要辅助因子，二价金属离子螯合剂对它的活性无任何影响，故在提取RNA时，应尽力减少RNA酶对RNA的降解作用。

创造一个无RNase的环境主要包括两个方面的工作，即极力避免外源RNase的污染和尽力抑制内源性RNase的活力。前者主要来源于操作者的手、实验的器皿和试剂；后者主要来源于样品的组织细胞。RNA提取应在洁净的环境中进行，戴口罩和手套操作，使用一次性无菌器具，玻璃器皿用0.1%二乙基焦碳酸盐(diethyl procarbonate, DEPC) 按规定消毒，所用试剂也应经专门的消毒灭酶处理。内源RNA酶则采用加入抑制剂及向提取液中加入可使所有蛋白质变性的试剂：如异硫氰酸胍(GTC) 和F巯基乙醇，盐酸胍，尿素，去污剂(十二烷酰肌氨酸钠、SDS)，酚/氯仿，整个提取操作都在冰浴下(0~4℃) 操作。

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