预活化层析填料介绍

色谱填料又称层析介质，指填充在色谱柱中具有纳米孔道结构的微球材料，粒径一般在微米尺度，纳米孔道的孔径大小在5-200 nm范围内。色谱填料的形貌、结构、粒径大小和分布、孔径大小和分布、基质及表面功能基团等都影响着色谱填料的性能，其中基质影响着色谱填料的各种物理性能，比如机械强度、载量等，表面功能基团则影响着分离模式和分离选择性，即色谱填料的使用方向。色谱填料根据分离模式可分为预活化层析填料、凝胶过滤层析填料、疏水层析填料、离子交换层析填料、亲和层析填料和多模式层析填料等。

预活化层析填料可以偶联一个特定的配基，制备成一个可以纯化一种或者几种目标分子的亲和填料。例如，可以使用抗体、抗原、酶、受体、小的核酸或者多肽作为配基，纯化能与它们结合的相应的配体。

BioToolomics开发了多种预活化层析填料，可以高效、快速、简便、安全地偶联各种功能配体。预活化填料的基质是由琼脂糖制成的，具有亲水性强、非特异性吸附低的特点，并且基质已被高度交联，具有很高的机械强度。

制备预活化亲和层析柱的注意要点：

（一）配基的选择

通常情况下，当配基分子量＜5 KDa时，需要间隔臂；对于大分子配基，间隔臂不是必须的选择条件。例如，NHS活化琼脂糖层析填料有一个长间隔臂（11个原子），特别有助于固定结构受限的配体。而CNBr则没有间隔臂，对于小分子配基（＜5KDa），当配基和样品结合的时候，由于CNBr没有间隔臂，可能会由于空间位阻而影响结合。因此当配基分子量＜5 KDa时，建议使用NHS活化配基填料。对于大于5KDa的配基，二者差异不大。

（二）偶联方法的选择

配基是通过其功能基团的反应偶联到基质上，所以偶联方法的选择取决于配基的特性。NHS、羧基、CNBr、醛基活化琼脂糖填料通过配基的伯胺基团进行偶联，这几种最主要的区别是NHS和羧基含有间隔臂，而CNBr和醛基没有间隔臂，此外，NHS和羧基能耐受较高的pH值。环氧活化琼脂糖填料可通过与羟基形成的稳定醚键固定糖和其他碳水化合物，它们也可用于偶联含伯胺或含硫醇的分子。肼活化琼脂糖层析填料通过形成稳定的腙键偶联含醛或酮的配体。

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